毕业季课本卡点模板（干货终于开学了）

在度过了一个漫长的假期后，终于盼来了开学。假期充值一时爽，一直充值......那些凝结着我们心血的实验样本可就不爽了！本以为休息十天半个月就能回来提取，因此并没有按照长期保存的标准对样本进行保存，你的核酸样本可还好？开学季到来，各种担心也接踵而来，回到实验室之后重新对样本进行采集和保存也成为了当务之急。那我们应该如何对核酸提取的样本进行正确的采集和保存呢？接下来，小V就跟大家一一道来。

用于核酸提取的生物样本采集原则

随着核酸检测技术的发展，对待测生物样本的质量要求也越来越高。作为核酸提取的重要组成部分：样本采集与保存的正规化，也成为核酸质量把控的关键环节。

在样本采集时往往会受到很为潜在影响因素的影响，且这些因素大多难以控制，所以在样本采集时我们需要满足以下两点基本原则。

❖ 新鲜原则：新鲜状态下的样本所受到的内源性核酸酶的影响相对最小，因此提取出的核酸质量相对更好。

❖ 适量原则：样本投入量过多容易导致样本裂解不充分，并引入过多杂质导致所提取的核酸纯度受到影响；而样本投入量过少，则会导致提取的核酸浓度过低。

注意：需要对生物样本进行编号记录，同时编号需遵循简单性，唯一性，稳定性原则。

常见类型核酸提取样本采集与保存方法

不同类型的样本由于其自身特点不同，所以在采集和保存的方法上也会有所差异。所谓“因材施教“，样本采集和保存也是如此，接下来我们就来看看常见的一些样本类型应该如何操作？在这个过程中又有哪些容易忽略的小细节呢？

1、动物组织样本

建议采集流程

（1）准确切除所需组织后应立即剔除结缔组织和脂肪组织；

（2）在RNase-free的生理盐水中迅速漂洗样本以去除血渍和污物；

（3）转入用油性记号笔标记的铝箔或冻存管中。

建议保存方法

若样本30 min内不进行核酸提取则需立即进行液氮冷冻，在-20℃下短期保持（如：小鼠肌肉组织3个月左右开始出现降解）；放入液氮或转入-80℃超低温冰箱中长期保存；该操作过程最好在冰上进行，并且避免后期反复冻融。

2、植物组织样本

建议采集流程

（1） 尽量采集体态正常的新鲜样本放入样本袋中做好标记；

（2） 样本若有泥土一般需要洗涤，之后对其进行干燥并尽快进行核酸提取，若在偏远地区野外可考虑盐干燥[2]。

Tip：植物样本采集要保证样本有充分的代表性和典型性，而且采样时间和部位要统一；对于含有多糖多酚等次生代谢产物的衰老叶片可在4℃黑暗环境下饥饿1-2天。

建议保存方法

若不立即进行核酸提取，短时间内可进行低温保存，若保存时间较久需液氮冷冻后转入超低温冰箱中保存。

3、血液样本

全血建议采集方法

一般使用抗凝采血管(不推荐肝素抗凝管)从外周静脉采集，若进行低温冷藏，需要完整血细胞，则需加入二甲基亚砜[3]。

建议保存方法

放置4℃条件下不得超过7天，若需长时间保存需液氮冻存后转移至-80℃冰箱。

血清、血凝块建议采集方法

建议使用橘黄色促凝采血管采集全血，待血液完全凝固后，1000 g离心10 min，分离血清，下层即为血凝块。该过程需要在采集后1小时内处理好，超过了这个时间，细胞活性会迅速下降，导致细胞结构脆弱，核酸降解。

建议保存方法

标本短期（15天）可在-20℃下保存，较长期保存应在-80℃下。

血浆建议采集方法

血浆是全血经抗凝处理后通过离心沉淀得到的不含细胞成分的液体。

建议保存方法

若不立即提取须放入-20℃ 或低于-20℃下进行保存。

单个核细胞建议采集方法

可以从抗凝全血制备，使用淋巴细胞分离液分离或者使用红细胞裂解液裂解全血中的红细胞，洗涤得到单个核细胞。

建议保存方法

如果不提取核酸，可保存于-80℃。

4、细胞样本

建议采集方法

采集细胞样本的容器应无菌、干燥、洁净具有防漏瓶盖，及时吸出培养皿中的培养液，将细胞培养至对数生长期后再进行核酸提取。

建议保存方法

将离心得到的细胞沉淀放入液氮冻存后于-80℃低温条件下保存。

5、液体样本

建议采集方法

体液包括胸水，腹水，脑脊液，尿液等可按水样标本的方式离心取沉淀后提取核酸。

建议保存方法

将离心后沉淀保存至-80℃冰箱。

6、粪便

建议采集方法

可借助粪便收集盒及粪便采集管进行采集，黄豆粒大小样本即可。

建议保存方法

4h内进行核酸提取或-80℃低温保存。

开学日在即，小伙伴们回到实验室后不妨先根据文中的样本保存条件周期对样本做个大致判断，之后抽样进行核酸提取，通过跑胶等方法判断核酸的完整情况，确保样本无恙，再开展实验研究。诺唯赞为您提供多款核酸提取产品，省时省力又省心！

参考资料：

[1] Watermann C, Valerius KP, Wagner S, et al. Step-by-step protocol to perfuse and dissect the mouse parotid gland and isolation of high-quality RNA from murine and human parotid tissue. Biotechniques. 2016;60(4):200–203. Published 2016 Apr 1. doi:10.2144/000114404

[2] Carrió E, Rosselló JA. Salt drying: a low-cost, simple and efficient method for storing plants in the field and preserving biological repositories for DNA diversity research. Mol Ecol Resour. 2014;14(2):344–351. doi:10.1111/1755-0998.12170

[3] Gautam A, Donohue D, Hoke A, et al. Investigating gene expression profiles of whole blood and peripheral blood mononuclear cells using multiple collection and processing methods. PLoS One. 2019;14(12):e0225137. Published 2019 Dec 6. doi:10.1371/journal.pone.0225137

[4] Bulla A, De Witt B, Ammerlaan W, Betsou F, Lescuyer P. Blood DNA Yield but Not Integrity or Methylation Is Impacted After Long-Term Storage. Biopreserv Biobank. 2016;14(1):29–38. doi:10.1089/bio.2015.0045

[5] Laktionov PP, Tamkovich SN, Rykova EY, et al. Cell-surface-bound nucleic acids: Free and cell-surface-bound nucleic acids in blood of healthy donors and breast cancer patients. Ann N Y Acad Sci. 2004;1022:221–227. doi:10.1196/annals.1318.034

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