不同定量方法蛋白浓度实测对比 不同定量方法蛋白浓度实测对比

紫外吸收A280法是利用蛋白中色氨酸和酪氨酸残基在紫外280nm波长处有特征性的吸收峰，并且其光吸收值与蛋白质浓度呈正比来测定蛋白质含量。

然而对于杂蛋白来说，溶液组成复杂，溶液中蛋白吸光系数不同，除此之外溶液中的核酸也会影响蛋白检测的结果，因而当蛋白溶液不纯时，利用比色法进行蛋白定量将是您实验的更佳选择。

一、实验方法

配置一系列浓度BSA蛋白标品，并用紫外吸收法A280与比色法分别检测BSA标品蛋白浓度。

二、检测方法

2.1 紫外吸收法A280定量蛋白浓度（奥盛Nano-500）

2.2 BCA法定量蛋白浓度（奥盛Nano-500）

2.3 BCA法定量蛋白浓度（奥盛FlexA-200全波长酶标仪）

三、检测结果

3.1 Nano-500的标准曲线建立

Nano-500微量分光光度计的比色法检测功能仅需2ul的上样量，仪器便可自动拟合出相应的曲线方程，并可导出保存，方便下次使用。

图1.Nano-500的BCA标准曲线

3.2 FlexA-200的标准曲线建立

全波长酶标仪FlexA-200的下位机软件可直接进行各种算法的运算，无需连接电脑便可直接对检测数据进行处理分析。

标准曲线功能可对标准品直接进行线性拟合，并提供拟合方程，也可通过显示未知样品功能对未知样品的浓度进行即时查看（如图2右）。

图2.FlexA-200的BCA标准曲线

3.3 不同检测方法的蛋白定量结果

由表1可以看出，当检测标品BSA纯蛋白时，紫外A280法与比色法的检测浓度基本无差异。

表1.不同检测方法的蛋白定量结果

综上所述，对于蛋白质标准品而言，A280法和比色法浓度检测结果无明显差异，但若是试剂提取的总蛋白时，结果又会如何呢？详细的结果我们将在下次的文章中带来。