培养基的制备及高压蒸汽灭菌（培养基及无菌水的制备方法）

一、基本原理

培养基的种类很多,不同微生物所需要的培养基不同.培养基制成后的物理状态可分为液体、固体、半固体三种类型.目前所用培养基均为已配制好的生物试剂和纸片。

二、器材

三角瓶、试管、烧杯、玻棒、天平、搪瓷杯、量筒、铝箔纸、角匙、杜氏小管、硅胶塞、电炉。

三、培养基的种类

营养琼脂培养基、乳糖胆盐发酵培养基、乳糖发酵培养基、伊红美兰琼脂培养基、马铃薯-葡萄糖琼脂培养基（附加抗菌素）、平板计数琼脂、月桂基硫酸盐胰蛋白冻肉汤、煌绿乳糖胆盐肉汤、EC肉汤、高盐察氏琼脂、三糖铁琼脂等。

四、方法步骤

1、培养基的制备：

（1）称量：根据培养基的配方,称取适量药品于搪瓷杯中;

（2）溶解：用量筒量取所需水量,置电炉上加热,一边搅拌,至完全溶解,加热至沸腾,拔掉电源,待冷却;

（3）分装：根据不同需要,立即趁热分装入三角瓶或试管中,分装三角瓶以不超过三角瓶一半为宜,分装试管一般为管长的1/5（需根据试管的大小而定）.液体培养基如乳糖胆盐发酵培养基约分装10毫升左右.

（4）塞硅胶塞：装好培养基的试管应塞上硅胶塞,松紧合适,紧贴管壁,不留缝隙,约1/2塞入内,这样即可过滤空气,避免杂菌侵入,又可减缓培养基水分的蒸发.

（5）包装：三角瓶棉塞头部应用锡箔纸包扎,试管集中于试管篓.

2、无菌水的制备：

（1）用10ml移液管量取9.2ml蒸馏水（稀释水）装入试管中.

（2）用100ml量筒量取95ml蒸馏水（稀释水）装入150ml的三角瓶中.可置少许玻璃珠于三角瓶内,防止暴沸.

（3）量取240ml蒸馏水（稀释水）于250ml的三角瓶中,塞上瓶塞用牛皮纸包扎好,高压灭菌备用.

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