植物体内过氧化物酶活性的测定 植物挥发性脂肪酸的测定

乙酸、丙酸、丁酸、戊酸、异戊酸等广泛地存在于自然界中，它们的共同特点是具有较强的挥发性，生物学上一般称之为挥发性脂肪酸（VFA），今天我们来看看如何通过比色法测定植物中的挥发性脂肪酸。

图片来源于网络

所有试剂除注明者外，均为分析纯。

1.1 硫酸（1:1）：浓硫酸加到相同体积的水中配制成稀硫酸。

1.2 酸性乙二醇：取30.0ml乙二酸与4.0ml配制的稀硫酸混合。

1.3 4.5mol/LNaOH：称取18.0gNaOH溶于水中，冷却后定容至100ml。

1.4 10%盐酸羟胺溶液：称取10.0g盐酸羟胺溶于100ml蒸馏水中。

1.5 羟胺试剂：量取40ml 4.5mol/L NaOH与10ml 10%盐酸羟胺混合。

1.6 酸性氯化铁试剂：称取20.0g氯化铁（FeCl3.6H2O)溶于500ml水中，准确加入20ml浓硫酸，并稀释至1L。

1.7 乙酸标准液：精确称乙酸(分析纯)1.0050g，稀释至100ml，此标准液含乙酸10mg/mL。

万分之一分析天平、分光光度计、水浴锅

将沼液样品以4000-10000r/min的离心条件下离心，得澄清的样品试液，备用。

4.1 标准曲线绘制

准确吸取10mg/mL乙酸标准液1.0ml、5.0ml、10.0ml、15.0ml、20.0ml、25.0ml、30.0ml分别置于100ml容量瓶中，以蒸馏水定容至刻度线，摇匀，即得100ug/ml、500ug/ml、1000ug/ml、1500ug/ml、2000ug/ml、2500ug/ml、3000ug/ml的乙酸标准系列液。

分别吸取0.5ml乙酸标准系列液置于试管中，准确加入1.7ml酸性乙二醇试剂，充分混合，置于沸水浴中加热3min，.然后取出并置于冷水中冷却，加入2.5ml盐酸羟胺试剂，混匀，放置1min，然后每个管中加入10ml酸性氯化铁试剂，用水定容至25ml，混匀静置5min，用分光光度计在500nm下测吸光度。

4.2 挥发性脂肪酸含量测定

吸取0.5ml于试管中，应用的试剂和操作步骤同4.1。

4.3 空白溶液制备

吸取0.5ml蒸馏水，应用的试剂和操作步骤同4.1

4.4 若浓度较高，可进行稀释后再测定。

挥发性脂肪酸含量（mg/L）=（C×V×1000）/N

式中：

C--为从校准曲线或回归方程求得的挥发酸的含量，mg；

V--为测量液体积，ml；

N--为稀释倍数；

1000--为换算因数。

来源：栢晖生物整理