灭菌柜的验证方案（关于灭菌柜BD测试）

BD测试是什么？

湿热灭菌饱和蒸汽和不饱和蒸汽释放的潜热有很大差别，为了验证灭菌柜空气移除能力而诞生了BD测试。

图1：验证中的脉动真空灭菌柜

一般脉动蒸汽灭菌柜除了每年的年度工艺参数验证确认外，还要对灭菌过程进行监测从而保证在灭菌确认中所确定的各项灭菌参数能够始终在日常的灭菌工作中保持恒定。针对这一方面ISOl7665也作出了相应的规定。除了要对灭菌基本的工艺参数验证，如灭菌过程的温度、时间和压力运行过程作出记录外，还要使用相应的生物和化学指示物对灭菌过程进行监测，这其中会涉及到相关的国际标准，例如ISO11138(生物指示物)，ISO11140(化学指示物)，ISO14161(生物指示物的挑选、使用和测试结果解释的评估，通过使用适当的物理、化学和指南)，ISO15882(化学指示物的挑选，使用和测试结果解释的指南)，EN一285(蒸汽灭菌器≥54L)，EN—l3060(小型蒸汽灭菌器<54L)。

我们都知道湿热灭菌原理是利用饱和蒸汽释放潜热使微生物的蛋白质及核酸变性灭活，研究表明如果灭菌蒸汽中含有1%的空气，则灭菌蒸汽的传热系数将降低60%，直接导致灭菌温度达不到设计标准，因此必须将脉动真空灭菌柜内的空气完全排除。所以要求灭菌腔室内最好没有空气残留，让进入腔体的蒸汽是饱和的，最大效力的发挥灭菌效力。通常待灭菌的包裹放置于灭菌舱内，如果要对其进行灭菌的话就必须首先将包裹内部的空气抽出来，然后将蒸汽打入到灭菌包裹的内部，并均匀分布于包裹内的各个部分，然后蒸汽才能在特定的温度和时间下发挥其灭菌功能。所以为了证明灭菌柜空气移除能力而诞生了BD包。（这里做个小小的纠正: BD测试又叫设备排气能力测试和蒸汽穿透测试，很多人把BD测试和真空测试混为一谈。）

谈到BD测试包，就不得不说说BD测试的起源：

BD测试由英国爱丁堡大学的Bowie教授与Dick助手在1963年提出，这一年他们完成了这一著名实验并针对此次试验做了相关的学术文章发表。

他们设计了一个6.6KG的布包，在这个布包的中心位置放上灭菌指示胶带，然后把它放置于灭菌柜内进行灭菌。如果这个灭菌指示胶带在灭菌后能够均匀地变色，说明这个灭菌器已经具备了将包裹内的空气全部抽出、同时将蒸汽穿透到这个布包内部的能力，这个灭菌器则可以每日进行灭菌工作了。之所以采用这个布包是因为当时医疗卫生领域的大部分灭菌物品为敷料类，或纺织品类和实体的器材，即无腔无孔的器材，因此当时认为这个布包代表了最难排气和蒸汽对灭菌物品的穿透情况，如果能够对它进行灭菌的话，那么医疗领域的大部分物品就都能被灭菌了。

因而针对大型蒸汽灭菌器的欧洲标准EN285将这个7kg的测试布包作为大型灭菌器的一项检测标准，即欧洲生产的大型蒸汽灭菌器必须能够将这个7kg的测试包内的空气抽出并将蒸汽打入到其内部，这样的灭菌器才符合欧洲标准EN285的要求，才能够在欧洲市场进行销售。

最初的BD测试使用的是测试布包，这个测试布包有2个版本，即欧洲版本为7kg，美国的版本为4kg，标准的BD测试布包在实际使用中是非常不方便的，而且其性能的稳定性很差。因为每个人打包的质量并不总是相同的，而且打包使用的布由于多次的洗涤也会影响BD测试的结果。所以目前国际上多使用可反复使用的BD测试装置，它们的形式多种多样，这些装置的内部可放置化学指示条，每次使用完毕后将指示条拿出检查结果并存档，再次使用的时候只需替换其中的指示条即可，既方便又经济。针对这些BD测试装置国际上也都有相应的标准(即ISOll140-4和ISOl1140-5)。

• 欧盟标准EN 258:2006描述了根据欧洲标准EN 867-3（已被国际标准“ISO 11140-3:2007:1”替代）结合B&D指示纸使用标准或简化（纺织）测试包的情况。
• 根据美国标准ANSI/AAMIST66（已被国际标准“ISO 11140-5:2007”取代），ANSI AAMI ST8:2013描述了标准或简化（纺织）测试包与B&D指示纸的使用。

BD测试目的

Bowie和Dick（B&D）试验，如欧盟标准EN 285:2015（和ANSI/AAMI ST8:2013）所述，是高真空多孔负载灭菌器成功排气的试验。在134°C/3.5min下进行（根据指示器制造商的要求，可选择121°C/15 min或其他时间和温度组合）。

成功的B& D测试表明蒸汽可以快速均匀地渗透到测试包中。空气留在包装内可能导致测试失败。由于以下原因，空气可能滞留在包装内：

1. 排气阶段不足；

2. 有空气漏入消毒室；

3. 蒸汽供应中存在不凝气体。

BD运行频率

综合EN 554及ISO 17665-2两项标准，BD的运行频率得看具体的设备使用情况：

1. 当设备非连续工作时，每天运行一次，时间是在第一次带负载灭菌程序运行之前进行，绝大多数客户的设备是符合这一情况的。

2. 当设备连续工作时，每天相同的时刻运行一次，但可以是任意时刻。

BD测试操作

图2：BD测试

• 因为BD是测试正常工作状态下的机器性能，而“冷锅”状态下运行BD（即每天设备第一次启动运作），不但测试环境不符合正常工作状态下的条件，也不符合BD测试包的设计使用要求，会导致错误的结果指引，因此BD测试并非是每天第一锅做！建议提前运行一遍预热程序，之后再去运行BD测试。

• BD包放在腔体可用灭菌空间的几何中心轴线上，距离腔体底平面100--200mm的高度，由BD测试支架支撑。

• BD测试程序中参数要符合BD测试包制造商的要求，特别是作用温度和维持时间。相关的要求参考 ISO 11140-5。常见的BD测试包有115℃121℃、134℃等多种规格的，根据实际情况选择适合的既可，灭菌时间要求参见各BD测试包厂商要求。

• 对121℃而言，灭菌时间为8min，对134℃而言，灭菌时间为3.5min。通常而言测试时间越短，对灭菌器的性能要求越高。因为时间短要求灭菌柜在更短的时间内产生足以令BD测试物变色均匀的热量。

• BD程序必须要与要运行的灭菌程序具有相同的空气去除阶段，否则就不能检测灭菌状态下的系统性能。正常我们的MMM脉动真空灭菌柜适用于固体多孔程序都会进行四次脉动，与BD测试程序脉动次数一致。

• BD测试结束后按照BD测试包制造商的使用说明验证测试结果，看颜色变化是否均匀。（图3）

图3

BD包选择

我国的BD试验大多采用的是4公斤的包，与美国标准一样。但欧洲标准一般比美国标准更严格，要求使用7公斤测试包。我们MMM Sterivap系列灭菌柜符合欧洲标准。理论上，根据欧洲标准设计出的正常灭菌器可以100%通过4公斤的BD测试，但根据美国标准设计的设备却很大几率不能通过7公斤的BD测试。因此关于BD包的选择，取决于您使用的灭菌器的设计标准，如果是根据美国标准设计,则必须使用4公斤包。如果是欧洲标准设计,最好应使用7公斤的BD包，因为使用4公斤的BD包，理论上会100%通过，但这样的测试结果不足以作为日程设备监测的参考。

现阶段简单的日常测试可以采用简化版的符合法规要求的BD包，方便快捷，省去了打包时间，以及人为打包的误差。

F&Q

&对于BD测试常见的几个问题及解释如下

Q1:问b-d测试纸/包是属于第几类化学指示剂？

A1:根据美国标准对化学指示剂的定义，b-d测试纸/包是第二类化学指示剂——用于测定测试的化学指示剂。

Q2:请问是不是所有的压力蒸汽灭菌器都需要做b-d测试？

A2:不是，根据《消毒技术规范》（2008年版）的规定，要求预真空和和脉动真空压力蒸汽灭菌器每日进行一次b-d测试，监测它们的空气排放效果。

Q3:请问b-d测试的作用？

A3:b-d测试是专用于测试预真空或脉动真空压力蒸汽灭菌器内或物品包内冷空气是否彻底排出，物品包内有否冷空气团存在，作为检测考核预真空压力蒸汽灭菌器是否可以正常工作的重要手段。

Q4:请问b-d测试的操作方法，以及b-d测试的结果判定？

A4:测试包水平放于灭菌锅内灭菌车的前底层，靠近柜门与排气口底前方；柜内除测试包外无任何物品.。134摄氏度，3.5min-4min后，取出b-d测试纸观察颜色变化，均匀一致变色，说明冷空气排除效果良好，灭菌锅可以使用；反之，则灭菌锅有冷空气残留，需检查b-d测试失败的原因。直至b-d测试通过后该锅方能使用。（《消毒技术规范》（2008年版））

Q5:请问下排气式压力蒸汽灭菌器是否需要做b-d测试？

A5:按照“消毒技术规范”的规定，要求预真空和脉动真空压力蒸汽灭菌器每日进行一次b-d测试，检查他们的空气排除效果。

Q6:bd试验不理想（合格），生物监测合格，是否可以继续进行灭菌工作？

A6:在标准的bd测试规范下，只要变色均匀的bd试纸均为合格，不一定要很黑。凡是bd测试合格的预真空锅可以继续进行灭菌工作。

Q7:对于bd测试，为什么第一次失败后可允许第二次再测试，第二次测试的意义在哪里？

A7:一般bd测试第一次失败后，可能是由于预真空锅的预热没有达到，或者整个设备管道中的冷空气还没有排尽等因素造成，从而影响了第一次bd测试的结果。第二次bd测试的意义在于完全的排出上述的干扰因素后，评估预真空锅的真空水平。

Q8:bd包内的bd纸能否抽出后换成新的继续使用？

A8:bd包就是为一次性使用而设计的，重复的使用可能造成包内材料的老化或者性质改变，失去标准包的功能，从而造成实验的不准确。