abts法测总抗氧化能力实验步骤（五种总抗氧化能力检测方法的简介及对比）

总抗氧化能力简介

氧化应激是体内产生的自由基超出了机体抗氧化清除的能力，引起细胞和组织氧化损伤的一种状态。防御氧化应激，主要依靠机体内的抗氧化体系。

根据清除机制的不同，抗氧化体系大致可分为两个系统：酶抗氧化系统和非酶抗氧化系统。每一个系统都存在多种物质。

氧化应激的产生与检测

体系内各种抗氧化大分子、小分子和酶的总水平，反映了该体系内的总抗氧化能力（T-AOC）。T-AOC能更全面地评价体液、细胞和组织匀浆、食品和饮料的抗氧化剂含量，广泛应用于医学、食品科学等相关研究。

02 总抗氧化能力的检测方法

a 铁离子还原抗氧化能力测定法（FRAP法）

FRAP法（ferric reducing antioxidant power），即在酸性条件下，Fe3 -TPTZ被样本中的抗氧化物质还原为蓝色的Fe2 -TPTZ，并在593nm波长处产生特征吸收峰。以Fe2 为标准，通过吸光度的大小，可以计算样本的抗氧化能力。

FRAP法测定步骤简单，速度快，但其本质是以Fe2 进行等量替代的计算方法，反应本身并不具备抗氧化能力的生物学相关性。

b 菲啉法

样本中的抗氧化物质能将Fe3 还原成Fe2 ，后者与菲啉类物质形成稳定的橙红色络合物，在520nm波长处产生特征吸收峰。通过测定吸光度的变化量，可以计算出抗氧化物质的还原能力。

该方法测定的最终结果以活性单位方式表达，便于与其他生理指标进行对比。但其特征吸收波长与部分样本及抗氧化剂的吸收波段有重叠，需要进行对照试验。

c ABTS法（TEAC法）

ABTS[2,2’-联氮-双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)]法，又称TEAC（trolox equivalent antioxidant capacity）法。ABTS与适当氧化剂作用后，会生成蓝绿色的ABTS阳离子自由基（ABTS• ），在734nm波长处产生特征吸收峰，当抗氧化物质存在时，ABTS• 的生成会受到抑制，使吸光度降低。与Trolox标准对照体系相比较，就能计算出样本的总抗氧化能力（TEAC值）。

ABTS法操作简单，结果重复性较好，非常适合实验室的分析检测，对水溶性和脂溶性抗氧化剂都适用，适用于大批量生物样品（包括血清在内）、果蔬类、部分纯物质等样本的体外抗氧化能力测定。

d 二苯基苦基苯肼（DPPH）法

DPPH•是一种稳定的氮中心显色自由基，在517nm波长处产生特征吸收峰。样本中的抗氧化物质会使DPPH•的吸光度减小直至消失，其吸光度的变化量在一定区间内与抗氧化物质含量呈线性关系。

DPPH法快速、简单，但其检测波长与部分抗氧化物质本身的吸收波段重叠（如类胡萝卜素）。因此，在检测该类物质时，结果会有一定偏差。

e 氧化自由基吸收能力测定（ORAC）法

ORAC（oxygen radical absorbance capacity）法测定氧化自由基的吸收能力，以AAPH为自由基来源，荧光素（SF）为指示剂，Trolox为定量标准。

荧光素受到自由基攻击后，荧光强度会持续衰减；抗氧化物质对自由基的吸收作用，能延缓荧光素的衰减速率。通过荧光分析仪，对荧光衰减曲线下面积（AUG）进行定量分析，可以计算样本的自由基清除能力。

ORAC提供的自由基与生理过程中的自由基具有高度一致性，具有较高的特异性。但其所需实验仪器较为昂贵，且对温度和荧光标记物要求较高，操作难度较大。

03 总结

总抗氧化能力的评价方法，因检测原理、反应条件等的不同而多种多样，每一种方法都有其适用范围和特点。

目前，还没有哪一种方法能够全面地评价出样本的总抗氧化能力。实验中，往往需要至少两种方法同时测定。对于具体样本，应根据分析条件和作用底物等因素，综合选择相应的检测方法。

以上五种方法中，DPPH法、FRAP法和 ABTS法较为简便易行，但DPPH、ABTS的化学性质使其偏离生物环境较远；FRAP法和 ABTS法在结果上具有很好的相关性与一致性，尤其是在成本和操作上，具有明显的比较优势。

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