哪些因素会引起cpl数值下降（注册营养师知识点）

神奈川试验（kanagawatest）即食品中副溶血性弧菌检验方法，属于食品中微生物的检验，标准是GB/T 4789.7-2008-副溶血性弧菌检验神奈川试验是在我妻氏琼脂上测试是否存在特定溶血素神奈川实验阳性结果与副溶血性弧菌分离株的致病性显著相关用接种环将测试菌株的3%氯化钠胰蛋白胨大豆琼脂18h培养物点种表面干燥的血琼脂平板每个平板可以环状点种几个菌35士1摄氏度培养不超过24h，并立即观察阳性结果为菌落周围呈半透明环的β溶血，下面我们就来聊聊关于哪些因素会引起cpl数值下降?接下来我们就一起去了解一下吧!

哪些因素会引起cpl数值下降

神奈川试验（kanagawatest）即食品中副溶血性弧菌检验方法，属于食品中微生物的检验，标准是GB/T 4789.7-2008-副溶血性弧菌检验。神奈川试验是在我妻氏琼脂上测试是否存在特定溶血素。神奈川实验阳性结果与副溶血性弧菌分离株的致病性显著相关。用接种环将测试菌株的3%氯化钠胰蛋白胨大豆琼脂18h培养物点种表面干燥的血琼脂平板。每个平板可以环状点种几个菌。35士1摄氏度培养不超过24h，并立即观察。阳性结果为菌落周围呈半透明环的β溶血。

神奈川试验的内容

副溶血性弧菌有845个血清型，主要通过十三种耐热的菌体抗原(即O抗原)鉴定，而七种不耐热的包膜抗原(即K抗原)可以用来辅助鉴定，其致病力可用神奈川(kanagawa)试验来区分。该菌能使人或家兔的红细胞发生溶血，在琼脂培养基上出现β溶血带，称为"神奈川试验"阳性。神奈川试验阳性菌的感染能力强，多数毒性菌株为神奈川试验阳性(K )，多数非毒性菌株为神奈川试验阴性(Kˉ)。引起食物中毒的副溶血性弧菌90%神奈川试验阳性，通常在12h内出现症状。K 菌株能产生一种耐热型直接溶血素，Kˉ菌株能产生一种热敏型溶血素，而有些菌株能产生这两种溶血素。

神奈川试验的培养基和试剂

硫代硫酸盐柠檬酸盐-胆盐-蔗糖（TCBS）琼脂

3%氯化钠胰蛋白胨大豆〔TSA）琼脂

3%氯化钠三糖铁（TSI）琼脂

嗜盐性试验培养基

3%氯化钠甘露醇试验培养基

3%氯化钠赖氨酸脱狡酶试验培养基

3%氯化钠MR-VP培养基

我妻氏血琼脂

氧化酶试剂

革兰氏染色液

ONPG试剂

3%氯化钠溶液

Voges-Proskauer（V-P）试剂

弧菌显色培养基

API20E生化鉴定试剂盒或VITEKNFC生化鉴定卡

神奈川试验的设备和材料如下

恒温培养箱：36士1摄氏度；

冰箱2-5摄氏度；

均质器或无菌乳钵；

天平感量0.1g；

无菌试管：18mm*180mm,15mm*100mm；

无菌吸管：1mL(具0.01ml刻度）,10mL（具0.1ml刻度）或微量移液器及吸头；

无菌锥形瓶：500mL，250mL；

无菌培养皿：直径90mm；

全自动微生物鉴定系统（VITEK）；

神奈川试验的操作步骤

1.样品制备

1.1冷冻样品应在45℃以下不超过15min或在2-5摄氏度不超过18小时解冻，若不能及时检验应放于--15摄氏度左右保存；非冷冻而易腐蚀的样品应尽可能及时检验，若不能及时检验，应置2-5摄氏度冰箱保存，在24h内检验。

1.2鱼类和头足类动物取表面组织、肠或鳃。贝类取全部内容物，包括贝肉和体液；甲壳类取整个动物，或者动物的中心部分，包括肠和鳃，如为带壳贝类或甲壳类则应先在自来水中洗刷外壳并甩干表面水分，然后以无菌操作打开外壳，按照上述要求取相应部分。

1.3以无菌操作取检样25g（ml），加人3%氯化钠碱性蛋白胨水225mL，用旋转刀片式均质器以8000r/min均质1min，或拍击式均质器拍击2min，制备成1：10的均匀稀释液。如无均质器，则将样品放人无菌乳钵中磨碎，然后放在500mL的灭菌容器内，加225ml3%氯化钠碱性蛋白胨水，并充分振荡。

2增菌

2.1定性检测

将上述1:10稀释液于36℃士1℃培养8h～18h。

2.2定量检测

2.2.1用灭菌吸管吸取1:10稀释液1mL，注入含右9mL3%氯化钠碱性蛋白胨水的试管内，振摇试管混匀，制备1：100的稀释液

2.2.2另取1mL灭菌吸管，按上述操作依次制备10倍递增稀释液每递增稀释一次，换用一支lmL灭菌吸管.

2.2.3根据对检样污染情况的估计,选择三个连续的适宜稀释度，每个稀释度接种三支含有9mL3%氯化钠碱性蛋白胨水的试管，每管接种1mL。置36℃士1℃恒温箱内，培养8h--18h

3分离

3.1在所有显示生长的试管或增菌液中用接种环沾取一环，于TCBS平板或弧菌显色培养基平板上划线分离。一支试管划线一块平板，于36℃士1℃培养18h-24h。

5.3.2典型的副溶血性弧菌在TCBSL呈圆形、半透明、表而光滑的绿色菌落，用接种环轻触，有类似口香糖的质感，直径2mm-3mm。从培养箱取出TCBS平板后，应尽决（不超过1h）挑取菌落或标记要挑取的菌落。典型的副溶血性弧菌在弧菌显色培养基上呈圆形、半透明、表面光滑的粉紫色菌落，直径2mm-3mm。

4纯培养

挑取三个或以上可疑菌落，划线3%氯化钠胰蛋白胨大豆琼脂平板，36℃土l℃培养18h-24h。

5初步鉴定

5.1氧化酶试验：挑选纯培养的单个菌落进行氧化酶试验，副溶血性弧菌为氧化酶阳性。

5.2涂片镜检：将可疑菌落涂片，进行革兰氏染色．镜检观察形态。副溶血性弧菌为革兰氏阴性，呈棒状、弧状、卵圆状等多形态，无芽胞，有鞭毛。

5.3挑取纯培养的单个可疑菌落，接种3%氯化钠三糖铁凉脂斜面并穿刺底层，35℃士1℃培养24h观察结果。副溶血性弧菌在3%氯化钠三糖铁琼脂中的反应为底层变黄不变黑，无气泡，斜面颜色不变或红色加深，有动力。

5.4嗜盐性试验：挑取纯培养的单个可疑菌落．分别接种于不同氯化钠浓度的胰胨水，36℃士1℃培养24h观察液体混浊清况。副溶血性弧菌在无氯化钠和10%氯化钠的胰胨水中不生长或微弱生长，在7%氯化钠的胰胨水中生长旺盛 [2] 。

6确定鉴定

6.1生化试验：取纯培养物分别接种含3%氯化钠的甘露醇、赖氨酸、MR-VP培养基，36℃士1℃培养24h--18h后观察结果。隔夜培养物进行ONPG试验。

5.6.2API20E生化鉴定试剂盒或VITEK：刮取3%氯化钠胰蛋白胨大豆琼脂平板上的单个菌落，用生理盐水制备成浊度适当的细胞悬浮液．使用API20E生化鉴定试剂盒或VITEK鉴定。

7报告

当检出的可疑菌落生化性状符合要求时，报告25g(ml)样品中检出副溶血性弧菌。如果进行定量检测，根据证实为副溶血性弧菌阳性的试管管数，查最可能数（MPN）检索表，报告每克(毫升）副溶血性弧菌的MPN值。

参考资料：

• 1 一起副溶血性弧菌引起的食物中毒病原学分析 ．知网．2011-04-25
• 2 副溶血性弧菌引发食源性疾病的病原学检测及同源性分析 ．知网．2015-04-18

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