母猪的深部输精的规范操作（猪冷冻精液人工输精操作规程）

本文摘自《中国畜牧业》，2020年第18期。

作者：倪和民、邓晓彬、赵俊金、金通、刘建。

猪精液的冷冻包括稀释液的选用、精子冷冻和复苏等处理技术，其难点在于阻止精子内部形成使精子致死的冰晶结构，同时提高精子活率，避免冻融过程中对精子顶体和质膜的损伤。猪人工授精技术体系由精液采集、保存和输精等多个技术环节构成，在提高优秀种公猪和种母猪利用效率中发挥着重要作用，但猪人工授精涉及多个步骤，需要较高的操作技术、管理水平和经验。

日趋规模化、集约化的中国养猪业对猪繁殖技术和生物安全性提出了更高要求，猪人工授精技术体系必将实现质的突破，从而加快我国从养猪大国走向养猪强国的步伐。猪冷冻精液人工授精技术应运而生，猪冷冻精液具有保存时间长、生物安全性高、运输方便等优点，较好地弥补了猪人工授精技术的不足，对猪人工输精操作要求也更为严格。冷冻精液的猪人工输精方式多为深部输精，深部输精与普通输精相比，能更好地利用有限的精液量，减少公猪采精压力，提高公猪使用效率，降低固定成本。

20世纪50年代，人们开始研究猪精液冷冻保存技术，直到70年代才能将猪冷冻精液注入母猪输卵，通过深部输精的方法使母猪受精，之后各国才全面展开相关领域的研究。如今，在非洲猪瘟疫情形势复杂严峻下，猪冷冻精液技术也在全国逐步推广，以往的单纯依靠活体引种和常温精液配种已经不再是完整、安全、高效的繁育方法，猪冷冻精液技术既利于保种育种产业升级，又可提高公猪利用效率，减少公猪饲养量，减少猪场建设用地和设施，缓解环保压力。

一、猪冻精解冻前准备

解冻工具准备：解冻液、显微镜、恒温电热板、玻片、恒温水浴锅、温度计、 镊子、剪子、杵棒、秒表、干燥毛巾、记号笔、笔记本等。

解冻室恒温25～30℃；打开水浴锅用温度计量取水温，温度计与视线持平观察，且温度计处于水位中间位置不可触碰锅底，待温度恒温在37℃时放入稀释液等待稀释液恒温至37℃（稀释液放在钢圈内防止倾倒）；打开另一个水浴锅恒温至50℃，校准方法同上；打开显微镜和恒温电热板（37～40℃），把盖玻片和载玻片放在恒温电热板上预温待检精液活力。

二、猪冻精剂量及稀释比例

每一支0.5毫升猪冻精细管为5亿精子量。每1克解冻粉剂融于20克超纯水中（充分溶解使用）。建议每瓶猪冻精输精计量不低于同等级下的鲜精计量。

三、猪冻精解冻与稀释

待稀释液恒温至37℃，另一水浴锅的水恒温至50℃时开始解冻。

1.冻精解冻操作要领。

从 液氮中取出4支或6支猪冻精（冻精一直保持在液氮面以下，从液氮罐向水浴锅中夹精液时要“稳、准、快”，冻精取出暴露在空气中时间不可超过5秒，应迅速放入水中解冻）迅速放入50℃恒温水浴锅内（确保放入水中的每支冻精，不起霜，不粘连，不漂浮），同时按下秒表16秒（取精液，放水中，按秒表需一气呵成，勿出现“早按”“迟按”“错按”和“忘归零”等现象）后取出擦干，同时用棍棒把精液包捅到液氮面下，然后将空气端口的精液甩至棉塞端，对齐剪开空气端稀释至37℃的稀释液中，盖盖摇匀（迅速翻转摇匀至少2次，保证精子不产生沉淀现象）。

精液细管在解冻时眼观无明显裂口破损现象，解冻过程中出现空气端进水，解冻后不要晃动精液细管，避免水分与精液混合，应立即用剪刀剪掉进水部分，保证含有水分的部分不与稀释液进行稀释即不会影响产品质量。

2.冻精检测。

（1）在室温25℃以上的条件下，取10微升稀释并摇匀后的精液放在恒温板上的载玻片上，盖上盖玻片镜检。

（2）精液解冻后在水浴锅内复苏5分钟以上，再取样放在载玻片上缓1～2分钟即可检测活力。

（3）镜检活力合格后做好记录（耳号、品种、时间）或用记号笔标记。

（4）解冻好的精液要进行保温，避光运输或保存，建议20分钟内输精完毕。

四、深部输精

1.清洗工作。

先用千分之一的高锰酸钾溶液清洗母猪后躯及尾根（从里到外，不洗阴户），清洗完要停留15分钟。再用清水清洗，用干毛巾擦干（每头猪用一条毛巾，防止交叉感染）。最后用双蒸水清洗母猪外阴内外侧，并用干纸巾单方向擦干阴户内侧（叠纸巾时注意手指只接触纸巾边缘，防止污染纸巾）。

2.深部输精管使用步骤。

（1）拿到输精管后，先检查输精管的气密性是否完好，手握输精管时要注意手离海绵球的距离［距离要合适（10～15厘米），以便操作，手不能直接接触输精管］。

（2）一手翻开母猪外阴，一手拿预润滑过的输精管（输精管润滑采用5毫升硫酸庆大霉素注射液替代润滑剂效果更佳），先斜向下45°插入母猪阴户，再斜向上45°逆时针旋转插入母猪阴道，直至子宫颈口处（遇到阻力感）。

（3）接着准备插入内管，抓住外管后端，将内管插入（不能触碰内管的末端），然后缓慢地向前推送内管，如果感到阻力时，应稍等一会，因为子宫颈未完全松弛。内管完全插入后，将外管往母猪体内再推深一点，如果此时内管回退，说明位置不正确，再次轻推内管，内管仍保持不动，可以实施授精。

（4）拿出预配精液，核对精液瓶标签与母猪记录卡是否相符。

（5）将精液单方向翻转，使其均匀；将瓶盖头去掉，再挤掉几滴精液，以保证精液瓶口畅通，同时去掉前端死精，让空气进入，使精液瓶恢复原状。

（6）将精液瓶接在输精管上，一手推住外管，一手拿精液并缓慢、持续挤入。

（7）输精结束后将内管和输精瓶一起抽出。抽出内管后，稍微抬高外管，并用手指刺激母猪外阴30秒，再将外管拔出。

（8）操作结束后，放公猪在配种通道上1～2小时，注意隔开通道，每区域按照公、母猪1∶10的比例放置，以促进精液吸收。

注意：猪冻精每次解冻稀释后30分钟内输精完毕效果最佳，解冻后的精液在运送过程中必须放到配种箱、泡沫箱或装有36℃水的保温杯内和箱内，做好保温措施（这样做的目的是确保在精液活力最佳的时候给母猪输精，避免反复冷热应激而导致精子活力降低）。

五、结束语

严格遵守猪冻精技术操作要求，避免不当操作影响产品质量、影响母猪受孕能力，造成财产损失。猪精液冷冻保存技术可延长精液的保存时间，适应精液远距离运输，与猪人工授精技术配合应用，可以大幅度降低公猪的饲养数量和引种成本。虽然猪冷冻精液在产仔数和受孕率方面存在诸多不足，但猪冷冻精液的许多优点是常温精液所不能达到的，猪冷冻精液人工授精技术的推广与应用必将是今后养猪业的一个大趋势，只有通过严格规范化管理才能取得较高的经济效益。