细菌生长曲线的测定与绘制（使用多模式酶标仪测量细菌生长曲线）

该篇实验方法已经在PLoS One文章“A new analysis method for evaluating bacterial growth with microplate readers”中验证过。原作者将该方法的详细版本发表在Bio-protocol期刊，欢迎大家进入Bio-protocol期刊直接与作者交流。

在这篇Bio-protocol文章中，来自美国阿肯色大学的研究人员为我们描述了一种使用多模式酶标仪测量细菌生长曲线的方法。

1、该方法具有更好的时间分辨率、更高的效率且所需工作量较少，具有传统方法不可比拟的优势。

2、该方法具有创新之处，是一种基于时间导数的用酶标仪评估细菌生长的分析方法。

3、该方法应用范围较广，预计也适用于其他微生物。

根据生长曲线监测微生物的生长和增殖在微生物学和相关领域的研究中很常见，可以以此了解微生物的生长、抗生素药物的疗效以及微生物对新的环境条件和压力的应激反应。目前，传统的基于光度计和比色皿的生长曲线测量方法存在时间分辨率低、效率低和劳动力要求高等缺点。相比之下，使用酶标仪进行细菌生长曲线的测量通过利用自动化和并行能力，可以提供更好的时间分辨率、更高的效率和更少的工作量。然而，由于样品中其他成分的多重光散射或光吸收/散射会导致定量和数据解释的复杂性，酶标仪在生长曲线测量中的应用受到了阻碍。在这篇protocol中，作者以大肠杆菌为例，开发了一种新的基于时间导数的用酶标仪评估细菌生长的分析方法，突破了传统方法的限制，并为该分析方法提供了用于分析和可视化结果的自制程序。

step A. Preparation of initial liquid culture of bacteria

step B. Pre-treatment of 96-well plates and lids

step C. Setup of microplate reader and software

1. Turn on the microplate reader and open the Gen5 software.

2. Set up a new procedure/protocol in Gen5 (Figure 3).

a. Plate type: 96-well plate.

b. Use lid: checked.

c. Temperature: 37°C.

d. Shake: orbital for 0:10.

e. Kinetic measurement for a desired total time (e.g., 16 h, 24 h, or 48 h) and interval of 10 min with continuous orbital shaking.

f. Reading: absorption at 600 nm, fluorescence at excitation = 488 nm and emission = 525 nm.

step D. Growth curve measurements using microplate reader

step E. Finishing up

Representative data for the growth curves of E coli bacteria measured by a microplate reader and their time derivative

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原文链接：https://s.bio-protocol.org/2d054a1a3f13bed6

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