生物技术有哪些基础实验（干货分享史上最全30个生物实验技术及原理）

二十一、抑制差减杂交

是由Diatchenko等建立的以抑制性PCR和DNA差减杂交方法相结合的方法。

依据的主要技术有两点：(1)消减杂交；(2)抑制PCR。经抑制差减杂交后的cDNA群体不仅富集了差异表达基因(目的基因)，而且目的基因间丰度的差异经过均等化作用已基本消除，使消减后的cDNA群体为丰度一致的目的基因群体。

抽提两种不同来源组织的mRNA(tester和driver)，反转录成 cDNA,用4碱基识别酶(RsaI)或HaeIII酶切两种cDNA产生平端片段；将testerc DNA分成均等的两份，分别接上dapter1和adapter2两种接头，并与过量的经RsaI消化的driver样本变性后退火杂交。

第一次杂交后的4种产物：

a 单链testercDNA

b 自身退火的testercDNA双链

c tester和driver的异源双链

d drivercDNA

根据复性动力学原理，丰度高的单链cDNA退火时产生同源杂交速度快于丰度低的单链cDNA，因此第一次杂交使得丰度有差别的cDNA的单链分子的相对含量趋向一致。混合两份杂交样品，同时加入新的变性driver cDNA 进行第二次消减杂交。杂交完全后补平末端，加入合适引物(即adapter1和adapter2的部分特异序列)进行PCR扩增，只有含不同接头的双链DNA分子才可进行指数扩增,扩增产物即为目的片段。利用adapter上的酶切位点可进行克隆、测序等。

二十二、蛋白质芯片

二十三、Northern blot

二十四、Southern blot

二十五、荧光共振能量转移

二十六、双分子荧光技术

二十七、酶联免疫吸附测定（ELISA）

ELISA是一种免疫测定（immunoassay，IA）。

原理：抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，由此进行定性或定量分析。

二十八、His-tag纯化蛋白

His•Tag序列（6、8或10个连续的组氨酸残基）与固定在基于NTA(氮川三乙酸镍) -和IDA- 的His•Bind树脂上的二价阳离子Ni2 结合。洗去未结合蛋白后，用咪唑或稍低的pH洗脱并回收目标蛋白。该通用系统使得可在温和、非变性条件，或存在6M胍或尿素条件下纯化蛋白。

二十九、免疫组化

三十、各种分子标记技术的比较

限制性片段长度多态性(Restriction fragment length polymorphisms ，RFLP) 可以作为遗传标记,开创了直接应用DNA多态性的新阶段,是最早应用的分子标记技术。

RFLP 是检测DNA 在限制性内切酶酶切后形成的特定DNA 片段的大小,反映DNA 分子上不同酶切位点的分布情况,因此DNA 序列上的微小变化,甚至1 个核苷酸的变化,也能引起限制性内切酶切点的丢失或产生, 导致酶切片段长度的变化。

随机扩增多态DNA (Randomamplified polymorphic DNA ，RAPD) 技术，由于其独特的检测DNA 多态性的方式使得RAPD技术很快渗透于基因研究的各个领域。RAPD 是建立于PCR 基础之上的分子标记技术。

基本原理：利用一个随机引物(8～10 个碱基) 通过PCR 反应非定点地扩增DNA 片段,然后用凝胶电泳分离扩增片段来进行DNA 多态性研究。对任一特定引物而言,它在基因组DNA 序列上有其特定的结合位点,一旦基因组在这些区域发生DNA 片段插入、缺失或碱基突变,就可能导致这些特定结合位点的分布发生变化,从而导致扩增产物的数量和大小发生改变,表现出多态性。

扩增片段长度多态技术(AFLP) ,又名限制片段选择扩增技术(Selective restriction fragment amplifi2cation ，SRFA) ，1993 年，荷兰KEYGENE 公司的Zabean 和Vos 等发明。AFLP 是近年来迅速发展起来的一种分子标记技术，它将基因组DNA 用成对的限制性内切酶双酶切后产生的片段用接头(与酶切位点互补) 连接起来，并通过5′端与接头互补的半特异性引物扩增得到大量DNA 片段，从而形成指纹图谱的分子标记技术。AFLP 指纹呈孟德尔式共显性和显隐性遗传。

SSR 也称微卫星DNA ，是一类由几个(多为2～6个) 碱基组成的基序串联重复而成的DNA 序列，其中最常见的是双核苷酸重复,即(CA) n和(TG) n ，每个微卫星DNA 的核心序列结构相同，重复单位数目10～60 个,其高度多态性主要来源于串联数目的不同。

不同遗传材料重复次数不同，导致了SSR 长度的高度变异性,这一变异性正是SSR 标记产生的基础。

单核苷酸多态性(Single nucleotide polymorphism ，SNP) 被称为第3 代DNA 分子标记,是指同一位点的不同等位基因之间个别核苷酸的差异,这种差异包括单个碱基的缺失或插入，更常见的是单个核苷酸的替换，且常发生在嘌呤碱基(A 与G) 和嘧啶碱基(C 与T) 之间。SNP 标记可帮助区分两个个体遗传物质的差异，被认为是应用前景最好的遗传标记。

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