蔗糖转化反应速率常数的测定（蔗糖酶米氏常数）

蔗糖酶（-D-呋喃型果糖苷**酶EC3.2.1.26）：

1. 配12支蔗糖底物浓度分别为0、0.005、0.00625、0.0075、0.00875、0.010、0.0125、0.015、0.02、0.025、0.0375、0.050M（在35度水浴保温）；

2. 加入3单位/毫升的酶溶液（已在35度水浴保温），准确作用5分钟，终止反应；

3. 各吸取0.5毫升反应液与3，5-二硝基水杨酸，沸水浴5分钟，冷却后在540nm测定吸光度OD值；

4. 作图。

酶浓度对酶反应的影响：当底物浓度足够大时，所有的酶都被底物结合，酶促反应速度达到最大。

V=Vmax = K3[E]