斐林试剂和双缩脲试剂的相同点(班氏试剂和双缩脲试剂比较)
斐林试剂、班氏试剂和双缩脲试剂比较
1、斐林试剂和班氏试剂
(1)成分不同:班氏试剂的配置方法:400mL水中加85g柠檬钠和50g无水碳酸钠;50mL加热的水中加入8.5g无水硫酸铜。制成CuSO4溶液;把CuSO4溶液倒入柠檬酸钠溶液-Na2CO3溶液中,边加边搅,如产生沉淀可滤去。斐林试剂的配置为:斐林试剂甲液为0.1 g/mLNaOH的溶液。乙液为0.05 g/mL CuSO4的溶液。使用时,将4~5滴乙液滴入2 mL甲液中,混合后立即使用
(2)原理不同:柠檬酸钠和碳酸钠均为强碱弱酸盐,在水中它们均可水解产生OH-,与柠檬酸钠-Na2CO3溶液和CuSO4溶液混合时,Cu2 和OH-结合,生成Cu(OH)2与葡萄糖中的醛基(-CHO)反应生成砖红色沉淀。而斐林试剂则是CuSO4于NaOH发生反应生成Cu(OH)2。当然,无论用班氏试剂还是斐林试剂,归根结底都是Cu(OH)2与醛基(-CHO)在沸水浴加热条件下反应而生成砖红色的Cu2O沉淀,两者反应现象一样,这就是二者的相同之处。
(3)保存方式不同:斐林试剂甲和斐林试剂乙可产生较多地Cu(OH)2,很容易沉淀析出,因此斐林试剂一般为现用现配;而班氏试剂的配方中,柠檬酸钠为-Na2CO3一对缓冲物质,产生的OH-数量有限,与溶液混合后产生的Cu(OH)2浓度相对较低,不易析出,因此该试剂可长期保存。
2、斐林试剂和双缩脲试剂
(1)浓度不同:斐林试剂甲为0.1 g/mL NaOH溶液,斐林试剂乙液为浓度为0.05 g/mL的CuSO4;双缩脲试剂A为0.1 g/mL NaOH溶液(与斐林试剂甲完全相同),双缩脲试剂B为0.01 g/mL的CuSO4溶液(与斐林试剂乙液浓度不同)
(2)使用原理不同:斐林试剂是新配制的Cu(OH)2溶液,它在加热条件下与醛基反应,被还原成砖红色的Cu2 O沉淀,可用于鉴定可溶性还原糖的存在。用斐林试剂鉴定可溶性还原糖时,溶液的颜色变化过程为:浅蓝色→棕色→砖红色(沉淀)。
鉴定生物组织中是否含有蛋白质时,使用的是双缩脲试剂,发生的是双缩脲反应。双缩脲反应实质是在碱性环境下Cu2 的与双缩脲试剂发生的紫色反应。而蛋白质分子中含有很多与双缩脲(H2NOC-NH-CONHH2)结构相似的肽键,所以蛋白质都能与双缩脲试剂发生紫色反应,可以用双缩脲试剂鉴定蛋白质的存在。
(3)使用方法不同:斐林试剂使用时,先将NaOH溶液和CuSO4溶液等量混合,而后立即使用;双缩脲试剂使用时,先加入NaOH溶液(2mL),振荡摇匀,造成碱性的反应环境,然后再加入3~4滴CuSO4溶液,振荡摇匀后观察现象。如果混合后使用或者次序颠倒,则过多的Cu2 (蓝色)使溶液生成的紫色被掩盖,实验效果不容易观察。
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