高效液相色谱的原理及应用（高效液相色谱法的类型及应用）

高效液相色谱法根据分离机制的不同分为：液-固吸附色谱法、液-液分配色谱法、化学键合相色谱法、离子交换色谱法、凝胶色谱法和液相制备色谱法

液-固吸附色谱法

1、分离原理 液-固吸附色谱是固定相为固体吸附剂，它的分离原理是基于吸附剂表面对不同物质吸附能力的不同使混合物得到分离的。

2、固定相 液-固色谱法所用的固定相分为极性和非极性两大类，极性吸附剂有硅胶、氧化铝、氧化镁等，非极性吸附剂有活性炭。极性吸附剂又分为酸性和碱性，酸性吸附剂优先吸附碱性物质，碱性吸附剂优先吸附酸性物质。

3、流动相 液-固色谱中流动相选择的原则是：极性大的试样选择性极大的流动相，极性小的试样选择极性低的流动相。液固色谱不适宜于强极性的或离子型的样品的分离，不适用于分离同系物。

液-液分配色谱法

1、分配原理 液-液分配色谱法的固定相和流动相都是液体。一个液相作为流动相，另一个液相分散在细颗粒的惰性担体上做固定相，两种液相相互共存但互不相溶。当带有待测试样的流动相进入色谱柱时，溶质分子溶解到两种液相中并很快达到分配平衡，由于试样中各组分在两液相中分配系数的不同而达到分离。

2、固定相 液-液分配色谱常用的固定液有聚乙二烯、鱼鲨烷、聚酰胺等。固定液对各组分应有不同的溶液度，但应不溶于流动相中。在液-固色谱中所用的吸附剂都可用作载体，常用的载体有全孔型载体和表面多孔型载体。

3、流动相 液-液分配色谱所用的固定相和流动相极性差别极大。

化学键合相色谱法

1、化学键合相色谱 化学键合相色谱是采用化学键合固定相的色谱。化学键合固定相就是利用化学反应的方法将固定液键合到载体表面上。化学键合相色谱在高效液相色谱的整个应用中占80%以上，是近代液相色谱中占据重要地位。

2、反向键合色谱 反向键合色谱采用的是非极性键合固定相。非极性固定相是将全多孔微粒硅胶载体，经酸化处理，主要是 各种烃基硅烷键合相和苯基团。

3、正相键合色谱 正相键合相色谱采用的流动相是极性小于固定相的极性，适合于中等极性样品的分离，

4、离子对和离子抑制色谱 许多可解离的酸碱性样品、离子及带有可离解官能团的化合物，用一般的正相、反向色谱分离。

离子交换法

在离子交换色谱中，固定相是离子交换树脂，流动相常是水溶液，用于离子型和可离解样品的分离。它是利用待测样品中各组分离子与离子交换树脂的亲和力的不同而进行分离的。

凝胶色谱法

凝胶色谱法又叫空间排阻色谱法，它与其他色谱法的分离机制不同，近似于分子筛效应，固定相和样品分子间没有吸附或溶解作用。凝胶色谱法的固定相为多孔性凝胶类物质，流动相为水溶液或有机溶剂，它是根据不同组分分子体积的大小进行分离的。

高效液相色谱仪