土壤中脱氢酶活性测定方法（土壤脱氢酶的测定）

脱氢酶是一类氧化还原酶，它的作用是催化氢从被氧化的物体(基质AH)中转移到另一个物体(受氢体B)上:

AH B⇄A BH

已知受氢体可以接受脱氢酶脱出的氢原子，根据接受氢原子的量可以判断脱氢酶的活性。无色的氯化三苯基四氮唑(TTC，俗称红四唑)接受氢后变成红色的三苯基甲瓒(TF)，根据产生红色的色度进行比色定量分析，就可以判断脱氢酶的活性。

分光光度计（UV-1800PC，上海美普达仪器有限公司）

电子分析天平（JJ124BC，常州市双杰测试仪器厂）

离心机（KH20A，湖南凯达科学仪器有限公司）

水浴锅（HH-6孔，祥达仪器）

0.36%Na2SO3 溶液：称取0.3657g亚硫酸钠溶于100ml蒸馏水中；

0.05M Tris-HCl缓冲液(PH=7.6)：称取三羟甲基氨基甲烷，加1.0MHCl 20毫升，蒸馏水定容至1L；

0.4%TTC（氯化三苯基四氮唑）：称取0.4克TTC溶于100毫升蒸馏水中，每周新配；

Na2S2O4，甲醛，丙酮（分析纯）

1. 标准曲线的绘制

（1）按下表配置系列浓度的TTC标准溶液。

（2）显色

用药匙向每只比色管中各加入少许连二亚硫酸钠(Na2S2O4)，混匀，使TTC全部还原为红色的TF。用1~5ml移液枪向各管滴加1ml甲醛终止反应，摇匀后再加入2ml丙酮震荡摇匀，37℃水浴10min。

（3）测定吸光度，绘制标准曲线。

在485nm波长下测定各管溶液的吸光度A，并以A为纵坐标，TTC浓度为横坐标，绘制出TTC标准曲线。

2.壤脱氢酶活性的测定

（1）培养并显色

首先，按下表向四支离心管中分别加入以下物质

然后将以上四支离心管避光，37℃保温培养24h。

（2）培养结束后，用1~5ml可调试移液枪向各管分别加入1ml甲醛终止反应；再分别加入2ml丙酮震荡并于37℃下水浴保温10min。

（3）离心；将各离心管置于离心机中，4000r/min离心5min。

（4）测吸光度；取上清液在485nm波长下测定吸光度A，在标准曲线上查出相应的TTC浓度。

3.土壤脱氢酶活性的计算

脱氢酶活性（ug/g土/24h）=A×B×C

式中：

A为标准曲线中查的TTC浓度（μg/ml）；

B为培养时间的校正值（h）；

C为比色时的稀释倍数.

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