western blot 胶是用什么配制的（WesternBlot实验）

前面已经介绍过蛋白样品的制备及浓度测定，今天给大家介绍凝胶制备相关问题:

现在一些SDS-PAGE凝胶制备试剂盒操作简便，得到了广泛的应用。在实验室中，我们常用的凝胶制备试剂盒有碧云天和雅酶的。它们有可调控胶浓度试剂盒，也有固定浓度（eg:10％）凝胶试剂盒。其中碧云天凝胶试剂盒分离胶和浓缩胶都是无色透明状，雅酶的浓缩胶是彩色的，更便于看清加样孔。

[左上]一般我们采用1mm厚的玻璃板制胶，将玻板固定好确认其密封，配制分离胶（也叫下层胶）约5ml，缓缓注入玻板中，然后覆盖一水层，室温静置15～20min待胶凝固；去除水层，配制浓缩胶（也叫上层胶）约2ml，最后插上1mm的梳子，室温静置20min左右。

在这里值得注意的是，分离胶浓度的选择与蛋白分子量大小、目的蛋白分子量等因素密切相关。同一条件下，胶浓度越高，所需电泳时间越长。蛋白分子量小的蛋白，通常胶浓度选大一些，反之亦然。如果实验之前无法准确判断胶浓度如何选择，可以先用10％或12％的胶先做一次预实验，后续再根据实际情况优化实验条件。

浓缩胶一般是5％的浓度，不做其他浓度的调试。

胶注入玻板时，应避免产生气泡。在静置待胶凝固时，可根据实验室实际情况适当延长静置时间，若凝胶时间短，可能会导致电泳时出问题，进而影响实验结果。

胶凝固好后，可拔出梳子，尽快将玻板安装于电泳装置上，并在其电泳槽凹内加满1x电泳缓冲液，以形成闭合回路保证电泳。（也可以先安装固定玻板，倒满电泳缓冲液后再拔梳子）如若先拔梳子再加电泳缓冲液，可以使堵塞的胶孔有冲开的可能。