akt经典信号通路 自噬经典通路PI3KAktmTOR是如何套路3分文章的

akt经典信号通路 自噬经典通路PI3KAktmTOR是如何套路3分文章的(1)

作者:蚍蜉玉

今天小编要给大家分享的题目是《2,5-Hexanedione induces autophagic death of VSC4.1 cells via a PI3K/Akt/mTOR pathway》(回复170807可下载文献,一周有效),由文章的题目可知该文章是一个常见信号通路的类型,阅读者从题目可熟知的信息量则为:

在该文章中自噬是主要事件,2,5-Hexanedione,2,5-己二酮(HD) 是一个诱导剂,能够诱导细胞自噬,VSC4.1细胞系是事件发生的主体,而本文就是探讨诱导剂诱导主体发生主要事件的机制,那快来跟着小编看看新鲜总结的吧!

首先:发现现象HD诱导诱导细胞发生自噬和死亡;

其次:HD诱导诱导细胞自噬和凋亡与信号因子PI3k之间的关系;

再次:HD诱导诱导细胞自噬和凋亡与信号因子Akt之间的关系;

第四:HD诱导诱导细胞自噬和凋亡与信号因子mTOR之间的关系;

最后:HD诱导诱导细胞自噬和凋亡与 PI3K/Akt/mTOR通路之间的关系。

为了方便大家理解,小编特异搜索一个网站探索三者之间的信号网络关系:

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丝氨酸/苏氨酸激酶 Akt(又称作蛋白激酶 B 或 PKB)作为一种原癌基因,Akt 调控多个生物过程,包括细胞存活、增殖、生长和糖原代谢。PI3K 相关激酶 (PIKK) 家族成员,包括 DNA-PK,也同样能在 Akt 丝氨酸 473 位点将其磷酸化。Akt 通过作用于 TSC1/TSC2 复合体以及 mTORC 信号转导,进而调节细胞生长。

哺乳动物雷帕霉素靶蛋白 (mTOR) 是一种非典型的丝氨酸/苏氨酸激酶,存在于两个不同的复合体中。第一个为 mTOR 复合体 1 (mTORC1),乳动物雷帕霉素靶蛋白 (mTOR) 是一种非典型的丝氨酸/苏氨酸激酶,存在于两个不同的复合体中。第一个为 mTOR 复合体 1 (mTORC1),由 mTOR、Raptor、GβL 和 DEPTOR 构成,受 rapamycin 抑制。第二种复合体是 mTOR 复合体 2 (mTORC2),由 mTOR、Rictor、 GβL、 Sin1、PRR5/Protor-1 和 DEPTOR 构成。

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发现2,5-己二酮诱导剂可以诱导VSC4.1细胞自噬

培养VSC4.1细胞,并用三个不同剂量的2,5-己二酮(HD)处理之后,作者利用免疫印迹,免疫荧光以及电镜技术发现了HD诱导细胞自噬的现象,并且细胞自噬具有剂量依赖性。

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LC3位于细胞质,是自噬的标记性蛋白

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发现HD诱导自噬细胞发生细胞凋亡的现象

过度的自噬能够诱导自噬细胞的凋亡,为了检测是否是HD诱导自噬细胞发生细胞凋亡,用HD处理细胞24h后,然后用乳酸脱氢酶(LDH)检测细胞的凋亡情况,结果显示自噬的程度越高细胞凋亡的越多,两者呈正相关的关系。

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美腻腻的分割线。。。。。。以上便是主要事件发生在主体上的过程-HD诱导了细胞发生自噬,并且到一定浓度剂量时细胞发生死亡,那么接下来就看机制了。。。

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HD与PI3K

在HD和PI3K共在的情况下,细胞凋亡还是比对照组较高,但是 HD诱导的细胞凋亡在PI3K的存在下还是得到了缓解。利用免疫荧光和免疫印迹技术检测这些结果表明HD诱导的细胞凋亡能够被PI3K所阻断。

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HD与Akt

在调节自噬神经元死亡中 PI3K/Akt发挥了重要的作用,而且Akt是PI3K的下游的重要因子。为了检测PI3K/Akt的通路是不是受HD所调控和影响,在VSC4.1细胞中加入HD分三个剂量浓度处理24h,然后用蛋白检测Akt的表达水平。

Akt的表达水平在HD处理后没有发生变化,但是磷酸化的Akt显著的下降并且具有剂量依赖性。为了深入了解以上的结果,HD处理 VSC4.1细胞之后,然后分别加入或者不加入740Y-P,740Y-P是PI3K的激活剂。在740Y-P存在的情况下,下降的Akt水平被回升。这表明HD阻止了PI3K/Akt的信号通路。

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HD与mTOR

蛋白检测在VSC4.1细胞中,HD诱导下mTOR以及磷酸化mTOR的变化,结果表明磷酸化mTOR的水平与对照组相比显著下降,而且呈现剂量依赖性。为了检测mTOR的下降活性与抑制PI3K/Akt的通路相关,HD诱导的VSC4.1细胞处理740Y-P或者SC79。这些结果表明mTOR的失活抑制了PI3K/Akt通路。

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备注:条形图为蛋白灰度值统计结果图

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HD与PI3K/Akt/mTOR

为了检测HD诱导的过度自噬能够导致细胞死亡是通过PI3K/Akt/mTOR通路,作者将HD-极度兴奋的细胞用 740Y-P或SC79或 3BDO处理。用免疫荧光,免疫印迹及电镜技术检测细胞自噬的活性变化。

结果表明:与对照组相比, 740Y-P和SC79以及3BDO组,LC3标记的自噬细胞数目显著减少,LC3-II/LC3-I的表达比例显著增高。HD的诱导细胞自噬会被PI3K和Akt以及mTOR的激活因子所缓解,表明HD诱导的细胞自噬之后的凋亡是通过抑制PI3K/Akt/mTOR 通路。

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以上便是该信号通路PI3K/Akt/mTOR的主要内容,本文通过分总的方式,以免疫荧光,蛋白水平以及电镜的主要实验方法证明这条通路,怎么样,有没有套路到什么?

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