ips离子极化是什么(TLR4细菌LPS的受体)

ips离子极化是什么(TLR4细菌LPS的受体)(1)

Toll 样受体 4(Toll-like receptor 4,TLR4)是由 Poltorak 等于 1998 年发现的 一种 I 型跨膜蛋白,其由 TLR4 基因编码,并表达于包括单核细胞,巨嗜细胞在内 的多种组织细胞中,可以识别革兰氏阴性细菌的脂多糖(lipopolysaccharide,LPS), 并通过 NF-κB 或 JNK/SAPK 途径启动细胞内的信号转导(图 1)(对 LPS 及其检 测产品的相关介绍请见 http://www.uscnk.com/topic/LPS-ELISA-Kit-may-Substitutefor-LAL-Test.html)。

天然免疫(又称固有免疫)是指生物在种系进化发育过程中逐渐形成的免疫方 式,它在个体出生时即具备,不针对特定抗原且具有广泛的作用范围。天然免疫在 机体防御机制中具有重要意义,其可以作为防御致病微生物感染的第一道防线。研 究显示,TLR4 能通过直接识别包括 LPS,脂磷壁酸(lipoteichoic acid,LTA),dsRNA 等在内的病原相关分子模式(pathogen associated molecular pattern,PAMP)而在激 活天然免疫过程中起到关键作用。近年来,该分子在引起炎症反应,抗病毒感染, 肿瘤治疗和调节免疫应答等过程中的作用均得到了一定的研究。

常见的关于 TLR4 的研究包括体外和体内模型,而动物体内模型的研究多基 于小鼠模型,所以在小鼠的 TLR4 相关检测试剂方面,本公司进行了大量的研发 工作,并推出了多种产品,例如:重组蛋白 RPA753Mu01,该蛋白序列的选择 来自于对全长蛋白的拓扑结构分析和抗原表位分析,最后选定了包含 Asn26~Glu269 氨基酸的胞外区片段作为重组蛋白的表达序列,具体序列信息见 图 2。 该重组蛋白的 SDS-PAGE 鉴定图见图 3。

MHHHHHHSSGLVPRGSGMKETAAAKFERQHMDSPDLGTDDDDKAMADIGSEF-NPCIE VPNITYQCM DQKLSKVPDD IPSSTKNIDL SFNPLKILKS YSFSNFSELQ WLDLSRCEIE TIEDKAWHGL HHLSNLILTG NPIQSFSPGS FSGLTSLENL VAVETKLASL ESFPIGQLIT LKKLNVAHNF IHSCKLPAYF SNLTNLVHVD LSYNYIQTIT VNDLQFLREN PQVNLSLDMS LNPIDFIQDQ AFQGIKLHEL TLRGNFNSSN IMKTCLQNLA GLHVHRLILG EFKDERNLE

图 2 RPA753Mu01 序列信息

此后用该蛋白免疫兔,在获得抗血清后通过抗原特异性的亲和层析得到高 浓度和高纯度的抗体 PAA753Mu01,其 Western Blot 及 IHC 鉴定图见图 4 及图 5。 同时,对于该抗体进行各种标记物偶联,得到生物素、FITC 等标记的抗小鼠 TLR4 多克隆抗体(PAA753Mu71,PAA753Mu81)。

ips离子极化是什么(TLR4细菌LPS的受体)(2)

小鼠 TLR4 蛋白的物种来源是小鼠,而由于种属免疫特性的局限,制备该蛋 白的单克隆抗体不能使用小鼠作为免疫动物,基于这一点,本公司应用正在展 开的科研课题“大鼠单克隆抗体研发”,以大鼠作为免疫动物制备该蛋白的单 克隆抗体,产品正在研发中,请持续关注。

针对人的 TLR4 蛋白,本公司研发的重组蛋白 RPA753Hu01 包含的氨基酸 为 Phe326~Ile634,且用该蛋白不仅制备了多克隆抗体 PAA753Hu01 还制备了高 特异性的单克隆抗体 MAA753Hu22,其已被用于 WB、IHC 和 ELISA 等多项实 验中。

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