土壤速效磷的测定（土壤碱性磷酸酶的测定）

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以下所有试剂如无特别说明，均为分析纯。所用水为去离子水或蒸馏水。

（1） 甲苯

（2） 0.5% 磷酸苯二钠

（3）硼酸盐缓冲液（PH9.6与PH10.0）：称取12.404g硼酸（H3BO3）溶于700ml去离子水，用稀NaOH溶液调节至PH10.0，用去离子水稀释至1000ml

（4）氯代二溴对苯醌亚胺试剂：取0.125g 2,6-二溴苯醌氯酰亚胺，用10ml 96%的乙醇溶解，贮于棕色瓶中，存放在冰箱里。保存的黄色溶液未变褐色之前均可使用。

（5）标准溶液：

母液：1g酚溶于蒸馏水中，并稀释至1000ml，溶液保存在暗色瓶中

工作液：10ml溶液（a）稀释至1000ml（1ml含10ug酚）

（6）0.3%硫酸铝溶液

标准曲线绘制：取0，1，3，5，7，9，11和13ml酚工作液（b），置于50ml容量瓶中，每瓶加入5ml缓冲液和4滴氯代二溴对苯醌亚胺试剂，显色后稀释至刻度，30min后比色测定。以光密度为纵坐标，浓度为横坐标绘成标准曲线。

容量瓶（1000ml、200ml、50ml各若干）、烧杯、分析天平（0.0001g）、20ml量筒 、分光光度计（UV-1800PC）、胶头滴管、移液枪、恒温箱、小漏斗等

（1）取适量风干土置于200ml三角瓶中，用5滴甲苯处理15min后，加入20ml 0.5%磷酸苯二钠；

（2）将反应混合物置于37℃恒温箱中，培养24h后，在培养液中加100ml 0.3%硫酸铝溶液用致密滤纸过滤。

（3）无土对照：不加土样，其他操作与样品实验相同。以检验试剂纯度，整个实验设置一个对照

（4）无基质对照：对每个土样，设置以等体积的水代替基质，其他操作与样品实验相同。

（5）比色程序：取滤液3ml置于50ml容量瓶中，然后按绘制标准曲线所述方法显色。用硼酸缓冲液时，呈现蓝色，在分光光度计上于510nm处比色。

磷酸酶活性，以24h后1g土壤中释出的酚的毫克数表示：

酚（mg）=a ×8..............................(1)

(1)式中:

a——从标准曲线上查得的酚毫克数

8——换算成1g土的系数

以24h后1g土壤中释放出的酚的质量（mg）表示磷酸酶活性。

(2)式中：

a样品为样品吸光值由标准曲线求得的酚毫克数；

a无土为无土对照吸光值由标准曲线求得的酚毫克数；

a无基质为无基质对照吸光值由标准曲线求得的酚毫克数；

V为显色液体积；

n为分取倍数，浸出液体积／吸取滤液体积；

m表示烘干土重

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