从菠菜中提取叶绿素实验报告（富营养化水体中藻类的测定）

一、目的要求

通过测定水体中叶绿素a的含量来定量检测藻类的生物量。

二、基本原理

衡量藻类生长状况的生物学指标主要有代表藻类现存量的叶绿素a（mg/L）和生物指标。

藻类和浮游植物依靠光合作用生长，而叶绿素a是所有藻类的主要光合色素，因此水体中叶绿素a含量是反映藻类光合作用潜力的一种指标。叶绿素a含量反映藻类生物量的多少，常被作为衡量藻型湖泊水体中藻类现存量的代表性参数及评价水体富营养化状况的主导因子。叶绿素a、b的丙酮提取液在红光区的最大吸收峰分别为663nm和645nm，利用分光光度测定其光密度，即可用公式计算出提取液中的叶绿素a含量。

三、器材

真空泵、抽滤漏斗、0.45μm微孔滤膜（混合纤维）、滤膜、研钵、分光光度计、离心机、离心管。

四、操作步骤

（1）样品经微孔滤膜抽滤过滤。

（2）滤膜放入研钵内，每张滤膜加90％的丙酮溶液2～3ml，充分研磨，提取液放置在冰箱中4℃提取24小时。

（3）在3000～4000r/min下离心10分钟。

（4）取上清液移入比色皿内，放入分光光度计稳定一定时间，分别在750nm、663nm、645nm、630nm波长下测提取液的吸光度。

（5）叶绿素a含量的计算公式如下：

式中：V——样品体积（ml）；

D——吸光度；

V1——最后提取液体积（ml）；

δ——比色杯宽度（cm）。

思考题

1．计算出样品中叶绿素a的含量。

2．叶绿素a含量的计算公式的意义是什么？