设计引物时不必要注意的是(见鬼去吧引物设计原则)

实际的引物设计操作中,如果按照以上所有条款来设计引物,就等着老板来抽你吧PP5是最好的引物设计软件?错了,PP5只是最好的引物验证软件,用它来设计引物就完蛋了,连Tm值都算不准,今天小编就来聊一聊关于设计引物时不必要注意的是?接下来我们就一起去研究一下吧!

设计引物时不必要注意的是(见鬼去吧引物设计原则)

设计引物时不必要注意的是

实际的引物设计操作中,如果按照以上所有条款来设计引物,就等着老板来抽你吧。PP5是最好的引物设计软件?错了,PP5只是最好的引物验证软件,用它来设计引物就完蛋了,连Tm值都算不准。

下面来教你怎么设计qPCR引物吧,首先花1分钟找到基因的转录本序列。NCBI上找,如果遇到多转录本,可先用DNA STAR的MegAlign来进行比对,仅选取重合部分,这样就能扩增出所有转录本了。同时注意,仅选取3`末端序列,由于Oligo dT是从PolyA开始反转录的,所以如果片段较长的话,反转录酶可能无法把5`端序列全部给反转成cDNA。

好了,有了序列就要找引物了。不要用PP5了,太老了不好用,且PP5不能兼容Win7的系统。现在推荐你们两款软件,都是超赞的,PP6和AelleID6.0/BD 7.0,有这个在手,基本上就是傻瓜型的操作了。只要会输入序列,就能找到引物了,对引物会有具体的评分,Best、Good、Poor、Not Found,选取Best导出即可,如果是Poor或者Not Found,就调整一下参数如Tm值或引物长度,一般来说都是没问题的。

引物搜索,注意调整产物长度,Tm值及搜索范围。

来源:实验万事屋

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