设计引物时不必要注意的是（见鬼去吧引物设计原则）

实际的引物设计操作中，如果按照以上所有条款来设计引物，就等着老板来抽你吧PP5是最好的引物设计软件？错了，PP5只是最好的引物验证软件，用它来设计引物就完蛋了，连Tm值都算不准，今天小编就来聊一聊关于设计引物时不必要注意的是?接下来我们就一起去研究一下吧!

设计引物时不必要注意的是

实际的引物设计操作中，如果按照以上所有条款来设计引物，就等着老板来抽你吧。PP5是最好的引物设计软件？错了，PP5只是最好的引物验证软件，用它来设计引物就完蛋了，连Tm值都算不准。

下面来教你怎么设计qPCR引物吧，首先花1分钟找到基因的转录本序列。NCBI上找，如果遇到多转录本，可先用DNA STAR的MegAlign来进行比对，仅选取重合部分，这样就能扩增出所有转录本了。同时注意，仅选取3`末端序列，由于Oligo dT是从PolyA开始反转录的，所以如果片段较长的话，反转录酶可能无法把5`端序列全部给反转成cDNA。

好了，有了序列就要找引物了。不要用PP5了，太老了不好用，且PP5不能兼容Win7的系统。现在推荐你们两款软件，都是超赞的，PP6和AelleID6.0/BD 7.0，有这个在手，基本上就是傻瓜型的操作了。只要会输入序列，就能找到引物了，对引物会有具体的评分，Best、Good、Poor、Not Found，选取Best导出即可，如果是Poor或者Not Found，就调整一下参数如Tm值或引物长度，一般来说都是没问题的。

引物搜索，注意调整产物长度，Tm值及搜索范围。

来源：实验万事屋

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