细胞工程作业答案（细胞工程试卷）

试卷一一、名词解释：（本题共10小题，每小题4分，共40分），今天小编就来聊一聊关于细胞工程作业答案?接下来我们就一起去研究一下吧!

细胞工程作业答案

试卷一

一、名词解释：（本题共10小题，每小题4分，共40分）

1、动物乳腺生物反应器：利用哺乳动物乳腺特异性表达的启动子元件构建转基因动物,指导外源基因在乳腺中表达,并从转基因动物的乳液中获取重组蛋白。

2、细胞融合：又称体细胞杂交，是指两个或更多个相同或不同细胞在离体的条件下以无性方式通过膜融合形成单个杂合细胞的过程。细胞融合技术的出现标志着细胞工程的诞生。细胞融合使人们可以按照预先设计使不同的细胞融合，创造新的杂合细胞。

3、胚胎移植：也称受精卵移植，是指将良种母畜配种后，从其生殖道（输卵管或子宫角）取出受精卵或早期胚胎，移植到同种生理状态相同的母畜体内，使之继续发育成为新个体的技术。

4、胚胎干细胞：是从早期胚胎内细胞团（ICM）分离出来的，能在体外培养的一种高度未分化的多能干细胞。

5、核移植技术：是利用显微操作技术将一个细胞的细胞核移植到另一个细胞中，或者将两个细胞的细胞核（或细胞质）进行交换，从而可能创造无性杂交生物新品种的一项技术。核移植技术是目前最常用的动物克隆技术，也是哺乳动物体细胞克隆的核心技术，成为生命科学研究的热点。

转基因动物：指借助基因工程技术将外源基因导入受体动物染色体内，外源基因与受体动物基因发生整合后随细胞的分裂而扩增，在体内表达并能稳定地遗传给后代的动物。

7、染色体工程是人们按照一定的设计，有计划地消减、添加或代换同种或异种染色体，从而达到定向改变遗传特性和选育新品种的一种技术。

8、花药培养：是指将成熟或未成熟的花药从母体植株上取下，在无菌条件下，生长发育的技术。

9、愈伤组织：指在人工诱导或自然条件下，植物细胞脱分化，不断增殖产生的主要有薄壁细胞构成的不定形的组织。它通常从在伤口部位产生。

10、悬浮培养：指的是一种在受到不断搅动或摇动的液体培养基里，培养单细胞及小细胞团的组织培养系统。小规模的悬浮培养可在培养瓶中进行；大规模的需要利用生物反应器生产悬浮培养分为两种类型：分批培养和连续培养。

二、简答题（本题共5个小题，每小题6分，共30分）

1、简述获得转基因动物的一般步骤有哪些？

（1）外源目的基因的制备

（2）外源目的基因有效导入生殖细胞或胚胎干细胞

（3）选择并获得携有目的基因的细胞

（4）选择合适的体外培养系统和宿主动物

（5）转基因细胞胚胎发育及鉴定

（6）筛选所得的转基因动物品系

2、什么是原代培养，其生物学意义是什么？

原代培养就是初次培养，是从供体获取组织后的首次培养。其最大优点是组织和细胞刚刚离体，生物学特性未发生很大变化，仍具有二倍体遗传特性，最接近和反映体内生长特性，很适合作药物测试、细胞分化等实验研究

原代培养所有机能上的改变主要是表型上的改变，不一定为体细胞突变。因此，原代培养细胞也是研究基因表达的理想系统。原代培养是建立各种细胞系的第一步，是从事组织培养工作人员熟悉和掌握的最基本的技术。

3、何谓组织工程，组织工程的主要研究内容是什么？

组织工程是指应用工程学和生命科学的原理和方法来研究正常或病理状况下哺乳动物组织的结构、功能和生长的机制，研究开发能够修复、维持或改善损伤组织的人工生物替代物的一门学科。

组织工程的主要研究内容包括组织工程化皮肤、组织工程化骨骼、组织工程化血管、组织工程化管状器官、组织工程化腺体器官等。

4、单细胞培养的技术方法有哪些？

（1）平板培养：将细胞分散成单细胞，然后和含有琼脂的培养基混合，然后铺成平板。

（2）看护培养：在愈伤组织上放一张无菌滤纸，然后将单细胞置于滤纸上，单细胞在看护组织的看护下能分裂生长。

（3）微滴培养：在无菌条件下，在载玻片上用石蜡油和盖玻片等制成一微室，含培

养液的细胞培养在这一微室中，在显微镜下可进行细胞的生长、分裂和小细胞团形成的全过程观察。

（4）条件培养：加入条件培养液（经一定时间细胞悬浮培养的培养液）。适于单细胞或低密度的细胞的培养。

（5）饲养层技术：某种植物核失活的活细胞制成一薄层，把要培养的单细胞以液体浅层或平板培养在这一薄层上。适低密度的细胞。

5、简述农杆菌介导转化法的原理？

根瘤农杆菌的细胞中含有Ti质粒，其上有一段T-DNA，农杆菌通过侵染植物伤口进入细胞后，可将T-DNA插入到植物基因组中。人们将目的基因插入到经过改造的T-DNA区，借助农菌的感染实现外源基因向植物细胞的转移与整合，然后通过细胞和组织培养技术，再生出转基因植株。

三、论述题：（本题共2个小题，每小题15分，共30分）

1、详述胚胎干细胞法获得转基因动物操作过程及该方法的优缺点。

胚胎干细胞是从早期胚胎内细胞团（ICM）分离出来的，能在体外培养的一种高度未分化的多能干细胞。

（1）ES细胞的建立与维持：包括动物的准备、胚胎的分离和初培养、ICM的离散与ES的分离、ES细胞的扩增、ES细胞的常规培养。

（2）ES细胞的基因操作：

①与整合位点两端区域同源的两段DNA序列（HB1和HB2）

②转入的目的基因（TG）

③编码抗G418的新霉素磷酸转移酶基因（neor）

④两个不同的胸苷激酶基因（HSV-tk1和HSV-tk2）

（3）转基因ES细胞的筛选：正选择法筛选出转基因整合型ES细胞：通过物理方法将重组DNA分子导入ES细胞，在含有抗菌素G418的培养基中，没有整合外源基因的细胞将全部死亡，只有整合了外源基因的细胞才可以存活下来。负选择法筛选出特异整合型ES细胞：如果非特异性整合发生，则两个tk基因或其中一个基因很大可能与TG和neor一起整合，这时用GCV筛选，tk基因表达的胸苷激酶能反GCV转化成有毒的化合物，使细胞死亡。这是负选反择。

（4）转基因ES细胞的检测：应用PCR法等

（5）转基因小鼠的繁育正确整合的转基因胚胎干细胞经培养后就可以移入胚泡期的供体胚胎了。将这些胚胎移植到假孕的代孕母鼠子宫内，繁育转基因小鼠。

（6）获得纯合的转基因小鼠

2、外植体经哪些途径可以再分化为完整植株？

（1）直接从外植体的细胞分化形成器官原基，然后由器官原基进一步发育给完整植株；或从培养中的器官、组织、细胞或原生质体直接分化成胚，中间不经过愈伤组织阶段，如石龙芮的茎表面产生体细胞胚、槐树子叶在切口愈伤化的同时于外植体内部分化产生体细胞胚。

（2)外植体先在合适的条件下脱分化形成愈伤组织，愈伤组织再通过细胞分化、组织分化形成拟分生组织结节和微管组织结节，拟分生组织结节和微管组织结节发生联系，可能导致器官原基的形成，进一步可分化为器官，即由器官原基再逐渐形成芽和根。再进一步发育成完整植株。

（3)外植体先在合适的条件下脱分化形成愈伤组织，愈伤组织再通过再分化形成胚性细胞团，胚性细胞团再在合适的条件下（去掉或降低生长素的浓度，增加氨根离子的含量）按照胚胎发育途径发育成胚状体，然后从其相反的两极分别形成茎端和根端，然后发育成小植株。

试卷2

1、细胞工程：以细胞生物学和分子生物学为基础理论，采用原生质体、细胞或组织培养等试验方法或技术，在细胞水平上研究改造生物遗传特性，以获得具有新的性状的细胞系或生物体以及生物的次生代谢产物，并发展有关理论和技术方法的学科。

2、单克隆抗体只针对某一抗原决定簇的抗体分子称为单克隆抗体。

3、胚胎冷冻保存就是将动物的早期胚胎，通过使用特殊的保护剂和降温措施，使其长期何存在超低温环境下。主要方法包括常规冷冻法、一步冷冻法和玻璃化法。

4、显微注射：就是借助光学显微镜的放大作用，利用显微操作仪，直接把DNA注射到动物早期胚胎、胚胎干细胞、体细胞或卵母细胞中，然后生产动物个体的技术。

5、核移植技术：是利用显微操作技术将一个细胞的细胞核移植到另一个细胞中，或者将两个细胞的细胞核（或细胞质）进行交换，从而可能创造无性杂交生物新品种的一项技术。

6、动物生物反应器：一般把目的片段在器官或组织中表达的转基因动物叫动物生物反应器，几乎任何有生命的器官、组织或其中一部分都可经过人为驯化为生物反应器,从生产的角度考虑，生物反应器选择的组织和器官要方便产物的获得，例如，乳腺、膀胱、血液等，由此发展了动物乳腺生物反应器,动物血液生物反应器和动物膀胱生物反应器等。

7、染色体工程：是人们按照一定的设计，有计划地消减、添加或代换同种或异种染色体，从而达到定向改变遗传特性和选育新品种的一种技术。

8、悬浮培养：指的是一种在受到不断搅动或摇动的液体培养基里，培养单细胞及小细胞团的组织培养系统。小规模的悬浮培养可在培养瓶中进行；大规模的需要利用生物反应器生产悬浮培养分为两种类型：分批培养和连续培养。

9、早熟萌发幼胚接种后，离体胚不继续胚性生长，而是在培养基上迅速萌发成幼苗，通常称之为早熟萌发。在大多数情况下，一个幼胚萌发成一个植株，但有时会由于细胞分裂产生大量的胚性细胞，以后形成许多胚状体，从而可以形成许多植株，这种现象就是所谓的丛生胚现象。

10、人工种子：人工种子是将植物离体培养产生的体细胞胚包埋在含有营养成分和保护功能的物质中，在适宜条件下发芽出苗。人工种子包括体细胞胚、人工胚乳和人工种皮三部分。

二、简答题（本题共5个小题，每小题6分，共30分）

1、细胞融合的方法有哪些？

（1）仙台病毒法仙台病毒法包括4个步骤：

1)两种细胞在一起培养，加入病毒，在4°C条件下病毒附着在细胞膜上。并使两细胞相互凝聚；2)37°C中，病毒与细胞膜发生反应，细胞膜受到破环，此时需要Ca2 和Mg2 ，最适PH为8.0一8.2；3)细胞膜连接部穿通，周边连接部修复，此时需Ca2 和ATP；4)融合成巨大细胞，仍需ATP。

（2）聚乙二醇（PEG）法分子量大于200小于6000者均可用作细胞融合剂。由于PEG分子具有轻微的负极性，故可以与具有正极性基团的水、蛋白质和碳水化合物等形成H键，从而在在质膜之间形成分子桥，其结果是使细胞质膜发生粘连进而促使质膜的融合；另外，PEG能增加类脂膜的流动性，也使细胞的核、细胞器发生融合成为可能。

（3）电融合法电融合法是80年代出现的细胞融合技术，在直流电脉冲的诱导下，细胞膜表面的氧化还原电位发生改变，使异种细胞粘合并发生质膜瞬间破裂，进而质膜开始连接，直到闭和成完整的膜，形成融合体。

2、ES细胞的生物学特性有哪些？

（1）ES细胞形态结构及核型：各种动物的ES细胞具有与早期胚胎细胞相似的形态结构，胞体体积小，核大，呈克隆状生长，ES细胞中多为常染色质，核型正常，保留了整倍体性质。

（2）ES细胞的高度分化潜能：ES细胞在体外需在饲养层细胞上培养才能维持其未分化状态，一旦脱离饲养层就自发地进行分化。在单层培养时细胞自发分化成多种细胞，ES细胞还可进行诱导分化。

（3）碱性磷酸酶的表达：小鼠的EC细胞和ES细胞中均含有丰富的AKP。AKP常用来作为鉴定EC细胞或ES细胞分化与否的标志之一。

（4）胚胎阶段特异性细胞表面抗原的表达：早期胚胎细胞表面均表达胚胎阶段特异性表面抗原（SSEA－1）。SSEA也常作为ES细胞鉴定的一个标志。

3、简述获得转基因动物的一般步骤有哪些？

（1）外源目的基因的制备

（2）外源目的基因有效导入生殖细胞或胚胎干细胞

（3）选择并获得携有目的基因的细胞

（4）选择合适的体外培养系统和宿主动物

（5）转基因细胞胚胎发育及鉴定

（6）筛选所得的转基因动物品系

4、在组织培养中，如何区分早期芽和胚状体？1971年，Haccius对胚状体下了一个很好的定义，认为胚状体在组织学上必需同时具备三个特征：（1）最基本的特征是具有双极性，即在发育的早期阶段，从其方向相反的两端分化出茎端和根端，而不定芽和不定根都为单向极性。

（2）胚状体的维管组织与外植体的维管组织无解剖结构的联系，而不定芽或不定根往往总是与愈伤组织的维管组织相联系。

（3）胚状体的维管组织的分布是独立的“Y”字形，而不定芽的维管组织无此现象。

5．简述花药培养和花粉培养的异同？

花粉培养和花药培养异同点：花药培养属器官培养，花粉培养属细胞培养，但二者培养的目的一样，都是要诱导花粉细胞发育成单倍体细胞，最后发育成单倍体植株。培养特点及意义：花粉培养和花药培养都指在合成培养基上，改变其发育机能，即不经过受精发生的细胞分裂，由单个花粉粒发育成完整植物。由于都能获得同花粉染色体构成相同的单倍体植株，经染色体加倍而成为正常结实二倍体植株。所以后者属于真正的纯系。这和常规多代自交纯化方法相比，可节省大量的时间和劳力。同时，花药和花粉培养是研究减数分裂，花粉生长机制的生理、生化、遗传等基础理论的最好方法。

三、论述题：（本题共2个小题，每小题15分，共30分）

1、为何多莉羊的产生是生命科学领域的突破性工作？试分析克隆动物成败的原因以及克隆技术存在的问题。

（1）多莉羊的产生是生命科学领域的突破性工作，

原因有二：

第一，解决了使供体细胞与核受体细胞（去核卵细胞）同步的方法问题。

第二，解决了用体细胞做核供体与转基因的问题。（4分）

（2）克隆技术存在的问题：理论上存在的问题：

A）重构胚对遗传物质重编程的机理还不清楚。

B）克隆动物是否会记住供体细胞的年龄。

C）克隆动物的连续后代是否会累积突变基因。

D）在克隆过程中胞质线粒体所起的遗传作用等问题还没有解决。（4分）

实践中存在的问题：

1）克隆动物的成功率还很低；

2）生出的部分个体表现出生理或免疫缺限；

3）即使是正常发育的“多莉”，也被发现有早衰迹象（4分）除了以上的理论和技术障碍外，克隆技术（尤其是在人胚胎方面的应用）对伦理道德的冲击和公众对此的强烈反应也限制了克隆技术的应用。

2、外植体经哪些途径可以再分化为完整植株？

（1）直接从外植体的细胞分化形成器官原基，然后由器官原基进一步发育给完整植株；或从培养中的器官、组织、细胞或原生质体直接分化成胚，中间不经过愈伤组织阶段，如石龙芮的茎表面产生体细胞胚、槐树子叶在切口愈伤化的同时于外植体内部分化产生体细胞胚。

（2)外植体先在合适的条件下脱分化形成愈伤组织，愈伤组织再通过细胞分化、组织分化形成拟分生组织结节和微管组织结节，拟分生组织结节和微管组织结节发生联系，可

能导致器官原基的形成，进一步可分化为器官，即由器官原基再逐渐形成芽和根。再进一步发育成完整植株。

（3)外植体先在合适的条件下脱分化形成愈伤组织，愈伤组织再通过再分化形成胚性细胞团，胚性细胞团再在合适的条件下（去掉或降低生长素的浓度，增加氨根离子的含量）按照胚胎发育途径发育成胚状体，然后从其相反的两极分别形成茎端和根端，然后发育成小植株。

试卷三

一.名词解释（每题2分，共计10分）

生物技术：是以生物科学为基础，利用生物体的特性和功能，设计构建具有预期性状的新物种或新品系，以及与工程原理相结合进行加工生产，为社会提供商品和服务的一个综合性技术体系。

胚性发育：植物幼胚接种到培养基上以后，仍然按照在活体内的发育方式发育，最后形成成熟胚(有时甚至可能类似种子)，然后再按种子萌发途径出苗形成完整植株，这种途径发育的幼胚一般一个幼胚将来就是一个植株。

亚原生质体：在原生质体分离过程中，有时会引起细胞内含物的断裂而形成一些较小的原生质体，称作亚原生质体。它可以具有细胞核或没有细胞核。

体细胞胚：离体培养下没有经过受精过程，但经过了胚胎发育过程所形成的胚的类似物。

TE细胞：植物在系统发育中，由根和芽的原形成层或次生形成层细胞分化形成的管状细胞，它在维管系统的形成中具有中心作用。在离体培养条件下，TE细胞由愈伤组织薄壁细胞分化形成，这也是愈伤组织细胞分化器官的前提。

二.选择题（下列各答案中出一正确答案，其代在答相从题备选选个并将号写题纸应位置。每小处题1分，共10分。）

1.b是细胞全能性表达的最终体现。

a.脱分化；b.再分化；c.脱分化与再分化

2．愈伤组织的形成是脱分化的细胞重新进入活跃分裂的b。

a.过程；b.结果c.既不是过程也不是结果

3.植物组织培养常用的消毒剂中，下面哪种消毒剂的残液最难去除？ca.次氯酸钠；b.新洁尔灭；c.氯化汞

4.就一般规律而言，离体培养中光照的使用有b规律。

a.先强后弱；b.先弱后强；c.稳定光照

5.花粉培养属于a范畴。

a.细胞培养；b.组织培养；c.器官培养

三.简答题（每题4分，共计20分）

1.离体培养中器官发生的方式有哪几种？哪种发生方式最常见？

答：先芽后根、先根后芽、根芽同步。先芽后根最常见

2.细胞启动脱分化和再分化在细胞学上的标志性变化是什么？

答：脱分化：液泡蛋白体出现是启动脱分化的标志。

再分化：TE细胞的形成和出现极性。

3.离体繁殖中常用的增殖方式有哪些？其中离体繁殖优良品种时应选择什么方式增殖？为什么？

答：芽增殖、体细胞胚增殖、愈伤组织增殖芽增殖，因为变异小，稳定性高

4.什么是原生质体？原生质体分离前基础材料预处理的作用是什么？

动物细胞的原生质体就是细胞，植物细胞的原生质体是指去除细胞壁后的细胞膜包被的所有内含物。增强质膜韧性、降解贮存物质、有利于细胞同步化。

5.哪些因素会影响茎尖培养的脱毒效果？

答：母体材料病毒侵染的程度预处理起始培养的茎尖大小

四.简述题（每题8分，共计24分）

1.简述离体无性繁殖的意义。

（1）能够有效地保持优良品种的特性

（2）快速推广优良品种

（3）生产无病毒种苗，防止品种退化

（4）节约耕地，提高农产品的商品率

（5）便于运输

2.简述培养条件下提高细胞次生产物产量的途径。

选择适宜的组织器官作为外植体；注意培养基调整；合理利用前体和激发子。

3.举例说明如何调整诱导培养和分化培养不同阶段的激素和光照条件。

诱导培养：生长素与细胞分裂素平衡，无光照分化培养：低浓度生长素，高浓度细胞分裂素，有光照且有光周期。

五.论述题（共计18分）如何理解植物细胞离体培养时，细胞工程技术本身即包含了双重性：遗传稳定性和变异性？举例说明它们在各种细胞工程技术中的实际指导意义。

从遗传稳定性是相对的、变异是绝对的，对于单纯的繁殖技术而言，离体培养的技术操作是细胞或组织或个体的不断复制,因而一般来讲其繁殖群体具有较好的遗传稳定性。细胞工程还有一类技术操作，其目的就在于创造变异，如体细胞人工突变、基因转移、体细胞融合等。这些离体操作技术，在某种程度上说具有一定的目的性和方向性，可以在短期内获得从自然界可能要经过几年乃至上百年的进化才能获得的性状，从而加速了生物进化的进程。离体培养的环境亦可能诱导变异。

六.设计题（共计18分）现有某一种植物病害，在该植物的现有栽培种中无抗性基因，请你设计一个抗病育种方案并给出技术路线。采用体细胞杂交育种或体细胞突变或克隆基因和转基因方案均可，要求简要说明技术要点，并画出技术路线图。

试卷四

一.名词解释（每题2分，共计10分）

1．细胞工程：利用细胞生物学和分子生物学方法，借助工程学的实验方法和技术，在细胞水平上改造细胞遗传特性和生物学特性，获得特定的细胞、细胞产品或新生物体。

2．细胞脱分化：培养条件下使一个已分化的细胞回复到原始无分化状态或发生细胞状态的过程。

3．植物体细胞杂交：将植物原生质体经过人工方法诱导融合，然后进行离体培养，使之再生杂种植株。

4．植物体细胞无性系：离体条件下由任何细胞培养所产生的植株。

5．植物脱毒：利用植物组织培养技术脱除植物细胞中侵染的病毒，生产健康的繁殖材料。

二.选择题（下列各答案中出一正确答案，其代在答相从题备选选个并将号写题纸应位置。每小处题1分，共10分。）

1.根的分化需要较高浓度的生长素

2．花药培养属于器官培养范畴。

3.通过细胞培养可以获得三倍体植株。

4.细胞脱分化时，细胞器的变化表现为细胞核移至中央

5.植物组织培养常用的消毒剂中，下面哪种消毒剂对环境有污染，目前已经较少使用？氯化汞。

三.简答题（每题4分，共计20分）

1.花药培养时为什么要用较高浓度蔗糖和较低浓度激素？

抑制体细胞组织分裂，促进花粉细胞分裂，有利于单倍体的获得。

2.人工种子繁殖体有哪些类型？体细胞胚、微芽和微变态器官。

3.幼胚培养有几种发育途径？各有何特点？

胚性发育，一般1各胚再生1株苗；早熟萌发，1各胚可以再生多个苗；愈伤组织途径，再生多个苗，易产生变异。

4.细胞同步化主要有那些措施？

抑制剂处理法；低温处理法；分选法；饥饿法。

5.为什么胚乳培养的再生植株倍性常发生紊乱？胚乳细胞的遗传特性；高浓度的激素诱导。

四.简述题（每题8分，共计24分）

1.简述培养条件下提高细胞次生产物产量的途径。

筛选高产细胞系；调整培养基；合理利用激发子；合理选择培养系统。

2.如何理解体细胞胚的遗传稳定性和群体变异性？就单个体细胞胚而言具有遗传稳定性；就同一培养体系的体细胞胚群体而言，变异较大。

3.IAA易与氨基酸结合成复合体而失活，2,4-D多以自由态形式存在，因而启动

细胞分裂的能力较强，NAA界于二者之间。

五.论述题（共计18分）为什么说细胞工程技术是现代生物技术的桥梁和纽带（举例阐述）？从细胞工程与相关学科的关系分析入手，选择1-2个实例进一步阐述。

六.设计题（共计18分）请设计一个利用细胞工程技术建立遗传分离群体的实验方案。花药培养和花粉培养实验方案均可，需说明技术要点。

试卷五

一填空题（20分，40Х0.5）

1.植物组织培养的理论基础是细胞全能性，指分化细胞具有生物个体生长、发育所需要的全部遗传信息，具有发育成完整个体的潜能。

2.在植物个体发育中，不论是种子发芽、营养生长、繁殖器官形成以至整个成熟过程，主要由激素控制。生长素主要用来刺激细胞分裂和诱导根的分化。分裂素的生理作用主要是引起细胞分裂，诱导芽的形成和促进芽的生长。

3.脱分化后的植物细胞经过细胞分裂，产生无组织结构、无明显极性的松散的细胞团，称之为愈伤组织。

4.植物经组织培养的再生途径主要有器官发生、体细胞胚发生两条途径。

5.人工种子结构上从外向里包括三部分人工种皮、人工胚乳、胚状体或芽。

6.家畜性别控制方法有受精前、移植前两条途径。

7.细胞核移植所得到的动物称为核质杂种，根据供体细胞不同，有胚胎细胞克隆动物、体细胞克隆动物两类。

8.动物组织获得单个细胞与传代培养常用分散细胞的方法是酶解消化。

9.干细胞从来源上分为胚胎干细胞和成体干细胞、人工诱导多功能干细胞（IPS），从功能上包括全能干细胞、多能干细胞和单能干细胞。

10.细胞融合的物理、化学、生物方法有电场诱导、PEG诱导和病毒诱导。动物细胞融合在生物制药中最有代表性的应用是采用杂交瘤技术的单克隆抗体生产。

11.根据培养基与细胞收获方式不同，细胞培养的操作方式可以分为以下5种：分批、流加、半连续、连续、和灌注培养。产物与细胞生长关系有：偶联型、中间型、非偶联型。

12.组织工程三要素是：种子细胞、支架材料、细胞因子。用于组织工程的材料应该具有的两个最重要的特征是生物相容性和可降解性。

13.毛状根诱导一般利用的是含有Ri质粒的发根农杆菌，质粒上的T-DNA区可以转化并插入到植物细胞基因组中。

14.多倍体与单倍体育种属于染色体工程技术。

二判断题（10分，1Х1，认为对的打勾，错的打叉）

1.自然界动物多倍体要比植物多------------------------------（×）

2.三倍体一定是多倍体-------------------------------------（×）

3.体细胞杂交是解决远源杂交不亲和性的有力手段------------------------（√）

4.体外受精与人工授精在操作方面是一样的---------------------------（×）

5.人胚胎干细胞建系于1981年---------------------------（×）

6.体细胞杂交可以实现多基因的转移，比基因工程有优势--------------------（√）

7.微藻异养比光自养一般可以获得高的细胞浓度，同时可以使用传统发酵罐-（√）

8.胶原、聚羟基乙酸、透明质酸是组织工程常用的天然高分子材料---------（×）

9.对于在植物细胞生长平台期大量合成的次级代谢产物可以采用二步法培养工艺制备目标产物---------------------------------------（√）

10.毛状根培养生产次级代谢产物的培养基中需要添加激素-------------（×）

三简答题（20分，4Х5）

1.人工种子繁殖植物有什么优点？

（1）便于运输和储藏。

（2）人工胚乳可根据不同植物的要求配制，通过加入植物激素、有益微生物或抗病、抗虫成分，使人工种子优越于天然种子。

（3）可以固定杂种优势，加速良种繁育。

（4）可作为植物基因工程和遗传工程的载体。

（5）可保存珍贵稀有植物品种。

（6）利于快速繁殖，生产效率高。

2.微藻培养生产生物制品有哪些优点？

(1)利用太阳能和CO2通过光合作用生产有机物，生长速度快、效率高、能耗低。(2)微藻提取有效成分不需要复杂的前处理。

(3)种类多，许多微藻可产生有生理活性的化合物。

(4)可以利用贫瘠土地、盐碱地等极端环境。

(5)微藻培养简单，容易产业化。

3.动物细胞微载体生物反应器培养有哪些优点？

（1）模拟了体内三维生长环境，减轻了接触抑制，可以多层生长。

（2）很好地解决了生物反应器的空间分布问题，单位体积培养液的细胞产率高；培养系统占地面积和空间小；劳动强度小；放大容易，使大规模培养动物细胞成为可能。

（3）把悬浮培养和贴壁培养融合在一起，兼有两者的优点；可以稍加改造利用传统生物反应器。

（4）接种与收获方便；可循环、连续收获与培养，培养基利用率较高。

4.简述核移植动物培育的技术流程。

（1）核供体细胞的准备

（2）受体细胞的去核

（3）细胞核移植、激活

（4）重组胚的培养与移植

（5）核移植后代的鉴定

5.什么是体细胞杂交？在植物育种中有怎样的意义？

体细胞杂交（Somaticcellhybridization）是指将不同来源的体细胞融合并使之分化再生、形成新品种的技术。利用体细胞杂交技术可以克服一些远缘杂交的困难，更加广泛地组合起不同物种的优良遗传性状，从而培育出理想的新品种。

6.简述杂交瘤技术生产单克隆的原理。

将体外培养的小鼠骨髓瘤细胞与绵羊红细胞免疫小鼠脾细胞（B淋巴细胞）进行融合，融合形成的杂交瘤细胞具有双亲细胞的特征：既能像骨髓瘤细胞一样在体外无限地增殖，又能持续地分泌特异性抗体，通过克隆化培养获得纯的细胞就可以生产高纯度的单克隆抗体（McAb）。

三论述题（10分，10Х1）

比较分析植物细胞培养与组织培养的异同以及在生产次级代谢产物方面的优缺点。

植物细胞培养对象是植物细胞，而组织培养对象是植物组织，前者可以使用稍加改造的传统生物反应器，后者需要特殊设计生物反应器。

植物细胞培养

优点：

（1）不受季节、地域、气候和有害生物影响，培养条件可控；

（2）可以使用传统的生物反应器，借鉴微生物发酵的成熟技术；

（3）细胞培养相对比容易，容易放大；

（4）细胞水平上的调控相对比较容易；

（5）产物分离提取容易。

缺点：

（1）缺乏适合大规模生产的细胞株，细胞多次传代后稳定性差；

（2）合成的产物种类有限，浓度较低；

（3）需要激素等调控因子，成本高；

（4）对产物相关积累的机制途径尚不很清楚，很难维持最佳培养条件。

植物组织培养

优点：

（1）不受季节、地区、气候和有害生物影响，培养条件可控；

优点：

（2）遗传性状相对稳定，具有较稳定的次级代谢产物的合成能力；

（3）分化程度高，可产生高度分化的细胞合成的次生代谢产物，例如根、叶中合成的代谢产物；

（4）激素自养型，成本低；生长速度快。

缺点：

（1）需要特殊设计的生物反应器培养系统，存在尚未解决的工艺技术问题；

（2）需要特殊的培养、接种、取样技术，放大困难；

（3）调控相对比较困难；产物分离提取较复杂；

（4）对产物相关积累的机制途径尚不很清楚，很难维持最佳培养条件。

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